反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法中常見的污染問題及對策反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術,它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點,能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定,所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。筆者一直從事實驗室動物疫病檢測工作,現就應用RT-PCR實驗方法過程中出現的一些常見污染問題做如下論述,僅共同行參考和探討。 RT-PCR實驗有三步:提取RNA、反轉錄(RT)、PCR擴增及擴增產物分析,在這一過程中,最令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性。污染原因主要有以下幾個方面:1、樣品間的交叉污染收集樣品的容器最好使用一次性的,如重復使用,應在使用前應于180℃的高溫下干烤6小時或更長時間;樣品存放時要密封嚴實,以防外溢造成相互間的交叉污染;樣品在提取過程中離心管......閱讀全文
基因表達的檢測有幾種方法。經典的方法(仍然重要)是根據在細胞或生物體中 所觀察到的生物化學或表型的變化來決定某一特定基因是否表達。隨著大分子分離技 術的進步使得特異的基因產物或蛋白分子的識別和分離成為可能。隨著重組DNA技術 的運用,現在有可能檢測.分析任何基因的轉錄產物。目前有好幾種方
淺談RT-PCR實驗方法中常見污染問題及對策 河南出入境檢驗檢疫局技術中心 李軻 反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術,它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點,能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定,所以
聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發、皮膚或血液,只要能分離出一丁點的DNA,就能用PCR加以
實驗原理 PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術,它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點,能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定,所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。 筆者一直
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術,它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點,能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定,所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。筆者一直從事實
聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發、皮膚或血液,只要能分離出一丁點的DNA,就能用PCR加以放大,進行比對
在論壇上看到不停地有人在問RT-PCR的問題,實際上在以前的帖子中各位香主和eeflying(我為什么總是提他們?因為還是很佩服的哦,生怕自己說錯了,被他們指出來哦)都談到了很多,鄙人也充大頭答了一些問題,但是還是有各種問題,由于的基因表達還有點實戰經驗(但也技止此而),所以想些點東西給大家參考,計
19、武漢中幟生物科技股份有限公司(027-59368696) 武漢中幟生物科技股份有限公司是一家專業從事分子生物檢測及臨床醫學診斷新技術新產品研發、生產和銷售為一體的醫療器械類高新技術企業。 公司主打產品多重呼吸道病原體核酸檢測試劑基于自有核心專利技術——T7RNA恒溫擴增和多生物素信號放