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第一部分 基因組DNA的提取這一步沒有懸念，完全可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒，如果實驗室條件成熟，自己配試劑提取完全可以。DNA比較穩定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因組DNA應該是完整的。此步重點在于DNA的純度，即減少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取過程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除兩者。使用兩者的細節：1、蛋白酶K可以使用滅菌雙蒸水配制成20mg/ml；2、RNA酶必須要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在購買市售RNA酶后進行再處理，配制成10mg/ml。否則可能的后果是不僅沒有RNA，連 DNA也被消化了。兩者均于-20℃保存。驗證提取DNA的純度的方法有二：1、紫外分光光度計計算OD比值；2、1%-1.5%的瓊脂糖凝膠電泳。第二種方法優于第一種方法，這種方法完全可以明確所提基因組DNA的純度，并根據Marker的上樣量估計其濃度，以用于下一步的修飾。第二部分 亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA如......閱讀全文
第一部分 基因組DNA的提取這一步沒有懸念，完全可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒，如果實驗室條件成熟，自己配試劑提取完全可以。DNA比較穩定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因組DNA應該是完整的。此步重點在于DNA的純度，即減少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取過程中需使用蛋白
DNA甲基化 實驗方法原理 重亞硫酸鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 NaOH苯二酚（氫醌）亞硫酸氫鈉石蠟油儀器、耗材 離心管恒溫水浴鍋鋁箔紙實驗步驟 1.將約2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀釋至50ul； 2.加5.5ul新鮮配制的3M NaOH； 3. 42℃水
甲基化是目前的研究熱點，就我所做的一點工作并其中一點心得，與大家分享。希望能夠對大家有所幫助。 第一部分 基因組DNA的提取。 這一步沒有懸念，完全可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒，如果實驗室條件成熟，自己配試劑提取完全可以。DNA比較穩定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因組DNA應
此步細節：1：在使用注射器時，一定要用力均勻且輕，如使用暴力，會將小柱內的薄膜擠破，失去作用。2：乙酸銨、糖原不需新鮮配制，糖原配好后放在-20度保存，乙酸銨室溫即可，因為這樣濃度的乙酸銨非常難溶，一旦放在4度，取出用時也會有很多溶質析出。3：異丙醇、70%乙醇都不需要新鮮配制，但如果用量大，現場配
第三部分 修飾后DNA純化回收EP管如無特別說明均為高壓蒸汽滅菌的。1. 將移液器槍頭伸入石蠟油層下，先輕輕加壓使其中一小段石蠟油排出，然后吸取混合液至一潔凈1.5mlEP管中。2：以下使用Promega Wizard Cleanup DNA純化回收系統（Promega，A7280）1）70℃水浴預
第一部分 基因組DNA的提取。這一步沒有懸念，完全可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒，如果實驗室條件成熟，自己配試劑提取完全可以。DNA比較穩定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因組DNA應該是完整的。此步重點在于DNA的純度，即減少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取過程中需使用蛋
在甲基化分析中，亞硫酸氫鹽轉化通常是必經之路。它將未甲基化的胞嘧啶轉化成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，之后再結合PCR、測序等技術分析甲基化狀態。聽上去似乎很簡單，但要想獲得漂亮的結果，卻并非那么容易。轉化效率如何?回收率如何?這都是需要考量和優化的因素。 最近，QIAGEN
(1) 取供試品，加鹽酸，即發生二氧化硫的氣體，有刺激性特臭，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。(2) 取供試品溶液，滴加碘試液，碘的顏色即消退。 亞錫鹽 取供試品的水溶液1滴，點于磷鉬酸銨試紙上，試紙應顯藍色。 托烷生物堿類 取供試品約10mg，加發煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放
近年來涌現出不少 DNA 甲基化的檢測技術，少說也有十幾種。大致可以分為兩類：特異位點的甲基化檢測和全基因組的甲基化分析，后者也稱為甲基化圖譜分析 (methylation profiling)。下面大家介紹一些常用的方法。 特異位點的甲基化檢測 甲基化特異性 PCR (MS-PCR)