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在做qPCR實驗時，我們經常會問：“你是做絕對定量還是相對定量呢？”，而定量方法的選擇是取決于實驗的目標。絕對定量可測定目標核酸分子的實際拷貝數，但也是最費力、最復雜的定量形式。此方法要求周密的實驗方案和高度準確的標準曲線，常用于確定病毒滴度。 使用標準曲線進行絕對定量 絕對定量是通過樣品的Cq值和標準曲線進行比較實現的。首先為了建立標準曲線，需要已知拷貝數濃度的標準品，對標準品進行5次以上的連續梯度稀釋，將稀釋的標準品進行實時熒光定量PCR擴增，最后根據各樣品的拷貝數濃度及相應的Cq值繪制標準曲線，得到線性方程Cq= -klgX0+b，其中X0為起始模板量。然后將未知樣本的Cq值與此標準曲線進行比較，確定其拷貝數濃度。 從圖1可以發現，當模板起始濃度越大時，熒光達到閾值的循環數越少，即Cq值越小。反之，模板起始濃度越小時，Cq值越大。起始模板量的Log值與循環數Cq值呈線性關系，通過已知起始拷貝數的標準品......閱讀全文
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析，分析的都是PCR終產物。但是在許多
實時熒光定量PCR在人感染豬流感診斷中的作用彭年才12 張鎮西1 蘭鄒然3 黃兵3 李紅東2 李明2 苗保剛2 1西安交通大學生物醫學分析技術與儀器研究所 2西安天隆科技有限公司 3山東省動物疾病預防與控制中心200
實時熒光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，熒光定量）分類以及實驗步驟介紹實時熒光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，熒光定量）技術（Real-time quantitative PCR），是指在（QPCR，熒光定量）反應體系中加入熒光基因，
實時熒光定量PCR技術是指在PCR反應體系中加入熒光染料或熒光集團，利用熒光信號來實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板濃度進行定量分析。 病原學檢測是動物疾病確診的關鍵點，而聚合酶鏈式反應（PCR）是目前病原檢測的最常用的分子生物學技術，具有高敏感性的特征。PCR技術發展已日趨完
實時熒光定量PCR——一種科學準確的定量方法實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前已得到廣泛應用。本文試就其定量原理、
熒光定量PCR的檢測是一系列從采樣、保存運輸、樣品處理、核酸提取、擴增等一系列流程的組合，任何一個環節出現問題都會導致最終結果的錯誤。雖然在前面一系列的文章中講述了提取試劑、擴增試劑的評價但是這些仍遠遠不夠，因此我在后續的文章中會盡可能覆蓋到所有的檢測環節。 熒光定量PCR的檢測離不開熒光定量
淺析乳制品中高危害食源性致病菌--阪崎腸桿菌的快速檢測摘 要：2006年國家出臺的《嬰幼兒配方乳粉生產許可證審查細則》中明確要求采用國際通行的“熒光PCR儀”作為出廠檢驗必備設備，此要求已成為乳品企業生產許可證核發的必要條件。本文簡單綜述了國際通行的保證食品安全的食
定量PCR 定義 以參照物為標準對PCR終產物進行分析或對PCR過程的進行監測，來評估樣本中靶基因的拷貝數，稱為定量PCR相對定量→絕對定量， 手工操作→自動化檢測， 靈敏度與特異性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR擴增的指數期進行的。 特定的待擴增基因片段 起始含量越大，則指
分析測試百科網訊，根據《新型冠狀病毒肺炎防控方案（第五版）》，作為新型冠狀病毒肺炎診斷的“金標準”，除湖北地區在核酸檢測基礎上增加CT檢測外，全國其它地區以及全球各地區，目前都以核酸檢測陽性為確診依據。核酸檢測除了100多家試劑盒企業推出產品，主要比拼產能、靈敏度、獲得醫療器械注冊證的速度外，所
1、Ct值的定義在熒光定量PCR技術中，有一個很重要的概念--Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數。2、熒光域值（threshold）的設定PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設置是3-
我國是禽畜產品生產和消費大國。食品及飼料中動物源性成分的檢測關系食品安全和畜牧業安全。近年來，市場上屢次出現不法分子在肉制品中摻雜摻假現象，食品安全問題層出不窮，尤其是牛羊肉中，經常被曝光其中摻雜了一些豬肉、鴨肉甚至狐貍肉、老鼠肉等，涉嫌虛假宣傳欺詐消費者和侵犯消費者的合法權益，降低食品安全的公眾信
實時熒光定量PCR技術（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR，如果用于RNA檢測，這被稱為逆轉錄實時PCR即Real-time RT-PCR）是實時PCR法，它是指對DNA或經過反轉入（RT-PCR
嗜酸乳桿菌是重要的益生菌，被大量應用在食品中。研究表明嗜酸乳桿菌能在乳制品中產生乳酸，并能通過氨基酸代謝增加風味。嗜酸乳桿菌主要作用有降低pH值、產生抗菌素（如嗜酸菌素和乳酸殺菌素等），在一定程度上抑制腸道中有害微生物的有害作用。有研究發現嗜酸乳桿菌對大腸桿菌、腹瀉致病菌等均有抑制作用；大量的嗜
劉向國 謝國明 (重慶醫科大 重慶市 400016)摘 要 熒光定量PCR儀技術是一種新的核酸定量技術，該技木在PCR儀反應系統中引人了熒光標記探針，具有可實時監測，高靈敏性，高特異性和高精確性的特點，極大地克服了原有PCR儀技術的不足，擴大了PCR儀的應用范圍。關鍵詞 定量pcr；熒光；基因Flu
利用實時定量PCR和2－△△CT法分析基因相對表達量 METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2－△△CT M
PCR概念PCR，中文名是聚合酶鏈反應(基因擴增)基本原理 類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內DNA復制過程，在體外特異性擴增DNA片段的一種技術。PCR的應用領域：1、遺傳病和某些疑難病的診斷2、病原體的檢測。某些惡性疾病一般用微生
眾所周知，PCR（聚合酶鏈反應）技術自從1985年問世以來，經過十幾年的發展，已成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段，是一種極為敏感的放大系統。相比于傳統的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術，可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷，比如，核酸診斷能直接揭示病原體的存在，
實時熒光PCR檢測技術眾所周知，PCR（聚合酶鏈反應）技術自從1985年問世以來，經過十幾年的發展，已成為實驗室的常規技術。它是現代分子生物學研究中不可缺少的手段，是一種極為敏感的放大系統。相比于傳統的臨床診斷方法，核酸診斷是分子水平上的診斷技術，可以彌補傳統臨床診斷方法的某些缺陷，比如，核酸診斷能
摘要：指出了隨著人們生活水平的提高，食品安全越來越受到大家的重視。論述了目前食品安全檢測中常用的幾種現代檢測技術，主要有實時熒光定量PCR技術、核酸探針技術、酶聯免疫吸附技術（ELISA）和高效液相色譜-質譜連用技術（HPLC-MS）和近紅外光譜技術在食品安全檢測的應用及研究進展。
一、阪崎腸桿菌是腸桿菌科的一種:1980年由黃色陰溝腸桿菌更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎、小腸結腸炎和茵血癥，死亡率高達50% 以上。目前，微生物學家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報告表明嬰兒配方粉是目前發現的主要感染渠道。阪崎腸桿茵的生物學性狀及其對人群的健康危
聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction, PCR）是微量核酸擴增的有效工具，由于其靈敏、特異、快速等優點，在醫學上已廣泛應用與病毒、細菌病原體及遺傳病、腫瘤的早期診斷。隨著PCR技術的發展，特別是病毒或腫瘤的治療監測、疾病的診斷、機體基因表達調控方面，不僅需要檢測其存在是否
PCR實驗室產品選擇指南 熒光 基團是吸收一定波長的光子后發射特定波長的光波，可以作為抗體等分子的標記物，實時熒光定量PCR中的Taqman探針常用熒光基團FAM標記熒光基團和TAMRA標記。 熒光基團 吸收特定波長的光子后熒光染料(通常稱為“熒光基團”或簡稱為“熒光
嗜酸乳桿菌是重要的益生菌，被大量應用在食品中。研究表明嗜酸乳桿菌能在乳制品中產生乳酸，并能通過氨基酸代謝增加風味。嗜酸乳桿菌主要作用有降低pH值、產生抗菌素（如嗜酸菌素和乳酸殺菌素等），在一定程度上抑制腸道中有害微生物的有害作用。有研究發現嗜酸乳桿菌對大腸桿菌、腹瀉致病菌等均有抑制作用；大量的嗜酸乳
熒光定量PCR簡介 熒光定量PCR檢測技術誕生至今已10多年的時間，而其應用一直都沒廣泛展開，究其原因，無外乎受制于相關儀器、試劑和技術的發展。近期，尤其是08年以來，儀器和試劑是遍地開花，這也使科研人員均躍躍欲試，都想借此技術使自己的研究能突飛猛進，發展勢頭通過查找每年所發表的文章數可一目了然。據
感染性疾病有病原微生物引起，致病的病原微生物主要有病毒、細菌、衣原體、支原體和螺旋體等。這些病原體的傳統檢測方法通常采用形態學檢查，體外培養和免疫學試驗。但對某些難以培養的病原體，抗原抗體檢測不能判斷體內病原體 DNA 或 RNAde 復制情況，或存在檢測靈敏度低等問題。自聚合酶鏈反應（ PCR ）
聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增。在擴增反應結束之后，我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，也可以通過放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析。無論定性還是定量分析，分析的都是PCR終產物。但是在
熒光定量PCR的應用分子生物學研究1、核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉基因動植物基因拷貝數的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。2 、基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 （ 如藥物處理、物理
作者：中國科技大學 羅昭鋒 【摘要】：新冠狀病毒（2019-nCoV）檢測目前只有熒光定量PCR方法和測序方法兩種被認可的方法。測序不具備快速篩查潛力，這里不做討論。目前國家藥監局審批通過的都是熒光定量PCR的試劑盒。等溫擴增的檢測試劑盒，至少已有兩個單位開發成功，有望近幾天上市。等溫擴增的試
引言 PCR技術對基因從定性到定量的測定是分子生物學方法研究一大飛躍，定量PCR已成為目前分子生物學技術研究的熱點之一. 迄今研究和應用的定量PCR方法有4種，即PCR產物的直接定量；極限稀釋法；靶基因與參照基因的同步擴增；競爭性PCR法. 以上方法各有利弊，選擇某一方法取決于靶基因的特性，對準確度
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比