熒光標記雜交信號的檢測方法
由于熒光顯微鏡可以選擇性地激發和探測樣品中的混合熒光標記物,并具有很好的空間分辨率和熱分辨率,特別是當熒光顯微鏡中使用了共焦激光掃描時,分辨能力在實際應用中可接近由數值孔徑和光波長決定的空間分辨率,而在傳統的顯微鏡是很難做到的,這便為DNA芯片進一步微型化提供了重要的檢測方法的基礎。大多數方法都是在入射照明式熒光顯微鏡(epifluoescence microscope)基礎上發展起來的,包括激光掃描熒光顯微鏡、激光共焦掃描顯微鏡、使用了CCD相機的改進的熒光顯微鏡以及將DNA芯片直接制作在光纖維束切面上并結合熒光顯微鏡的光纖傳感器微陣列。這些方法基本上都是將待雜交對象 以熒光物質標記,如熒光素或麗絲膠(lissamine)等,雜交后經過SSC和SDS的混合溶液或SSPE等緩沖液清洗。......閱讀全文
熒光標記雜交信號的檢測方法
使用熒光標記物的研究者最多，因而相應的探測方法也就最多、最成熟。由于熒光顯微鏡可以選擇性地激發和探測樣品中的混合熒光標記物，并具有很好的空間分辨率和熱分辨率，特別是當熒光顯微鏡中使用了共焦激光掃描時，分辨能力在實際應用中可接近由數值孔徑和光波長決定的空間分辨率，而在傳統的顯微鏡是很難做到的，這便為D
熒光標記雜交信號的檢測方法
由于熒光顯微鏡可以選擇性地激發和探測樣品中的混合熒光標記物,并具有很好的空間分辨率和熱分辨率,特別是當熒光顯微鏡中使用了共焦激光掃描時,分辨能力在實際應用中可接近由數值孔徑和光波長決定的空間分辨率,而在傳統的顯微鏡是很難做到的,這便為DNA芯片進一步微型化提供了重要的檢測方法的基礎。大多數方法都是在
熒光標記雜交信號的檢測方法
使用熒光標記物的研究者最多，因而相應的探測方法也就最多、最成熟。由于熒光顯微鏡可以選擇性地激發和探測樣品中的混合熒光標記物，并具有很好的空間分辨率和熱分辨率，特別是當熒光顯微鏡中使用了共焦激光掃描時，分辨能力在實際應用中可接近由數值孔徑和光波長決定的空間分辨率，而在傳統的顯微鏡是很難做到的，這便為D
雜交信號的放大實驗——地高辛標記探針的信號
實驗材料雜交信號試劑、試劑盒地高辛SSCBSA熒光素儀器、耗材加濕盒水浴鍋培養箱實驗步驟1. ?用地高辛標記的探針與切片雜交并洗片（見“熒光原位雜交實驗”基本方案步驟1~6）。?2. ?加50 μl 10 μg/ml?的羊抗地高辛抗體Fab片段于玻片上，蓋以22 mm2?大小的Parafilm 膜，
熒光原位雜交的方法介紹
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是20世紀80年代末在放射性原位雜交技術基礎上發展起來的一種非放射性分子生物學和細胞遺傳學結合的新技術，是以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。
熒光素FITC標記抗體的方法
當FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應時，主要是蛋白質上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵（thiocarbmide）結合，形成FITC-蛋白質結合物，即熒光抗體或熒光結合物。一個IgG分子中有86個賴氨酸殘基，一般zui多能結合15～20個，一個IgG分子可結合2～8個分子的FITC，其反應式如下FI
熒光原位雜交的熒光原位雜交
熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結
共聚焦熒光探針標記方法
（一）BCECF測定pH值 1. 儲存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液，等份分裝后，－20℃避光保存。 2. 染色步驟 將培養細胞用PBS（含Ca2+、Mg2+）洗2遍。加入BCECF-AM（終濃度1～5μmol/L），37℃孵育30～60min。PBS（含Ca2+、M
熒光原位雜交檢測領域發展
鑒于FISH 起始階段的發展主要是探針類型和檢測位點的擴展，熒光檢測技術將來的發展可能包括檢測領域的擴展。熒光圖像臨床診斷應用需要在檢測體系上進一步提高，如探針的結合，照相和分析的自動化，因此避免了不同操作間的誤差。樣品厚度是熒光顯微鏡檢測樣品類型的一個限制因素。近來的激光共聚焦顯微鏡和光學X射
雜交信號的放大實驗
實驗材料 雜交信號試劑、試劑盒 生物素SSC熒光素親和素儀器、耗材 離心機培養箱實驗步驟 1. ?用生物素酰化探針與切片進行雜交、洗滌，進行第一輪雜交信號檢測。?2. ?如切片已承加蓋玻片并密封。可用一針頭或解剖刀片劃開密封的指甲油，移去蓋玻片， 并除去載玻片上指甲油。將玻片浸于0.1%Trit
熒光原位雜交（FISH）和用引物介導的原位標記（PRINS）...
熒光原位雜交（FISH）和用引物介導的原位標記（PRINS）操作規程設備??? 1、 醫用微波爐；???? 2、 水浴鍋；???? 3、 OLYMPUS BX51熒光顯微鏡；???? 4、 OLYMPUS DP11數字顯微照相機。FISH試劑??? （1）1×PBS：由10×PBS溶液稀釋而成，儲存
細胞骨架的熒光探針標記方法
細胞骨架主要有微管(micmtuble, MT)，微絲(microfilament, MF)，中間絲(intermediate filament, IF三種類型。它們分別由不同的蛋白單體組裝而成，其中微管蛋白(tubulin)、肌動蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是細胞骨架的重要組
熒光原位雜交實驗方法
熒光原位雜交實驗方法，實驗原理熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色
關于Southern雜交的探針標記簡介
用于Southern印跡雜交的探針可以是純化的DNA片段或寡核苷酸片段。探針可以用放射性物質標記或用地高辛標記，放射性標記靈敏度高，效果好；地高辛標記沒有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶進行末端標記。探針標記的方法有隨機引物法、切口平移法和末端標記法。
無需熒光標記也能檢測基因
據物理學家組織網近日報道，美國佐治亞大學的科研人員采用專門設計的納米材料，開發出了無標記的新型DNA和RNA檢測方法，有望降低常用基因檢測技術的成本和復雜性。相關研究報告發表在近期出版的《美國化學學會期刊》上。 科學家稱，他們的發現或可用于幫助醫生診斷白血病和淋巴癌等特定的癌癥，還能探測出
無需熒光標記也能檢測基因
美國佐治亞大學的科研人員采用專門設計的納米材料，開發出了無標記的新型DNA和RNA檢測方法，有望降低常用基因檢測技術的成本和復雜性。相關研究報告發表在近期出版的《美國化學學會期刊》上。 科學家稱，他們的發現或可用于幫助醫生診斷白血病和淋巴癌等特定的癌癥，還能探測出在組織中存在的病毒，同時可用于法醫
熒光原位雜交實驗——熒光原位雜交技術
熒光原位雜交可應用于：（1）動植物基因組結構研究；（2）染色體精細結構變異分析；（3）病毒感染分析；（4）腫瘤遺傳學和基因組進化研究。實驗方法原理用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱
美開發出無需熒光標記的新型DNA和RNA檢測方法
據物理學家組織網近日報道，美國佐治亞大學的科研人員采用專門設計的納米材料，開發出了無標記的新型DNA和RNA檢測方法，有望降低常用基因檢測技術的成本和復雜性。相關研究報告發表在近期出版的《美國化學學會期刊》上。科學家稱，他們的發現或可用于幫助醫生診斷白血病和淋巴癌等特定的癌癥，還能探測出在組織中存在
原位雜交組織化學雜交體檢測
? ?雜交體檢測又稱雜交體顯示，是指通過一定方法使雜交反應形成的雜交體（雜交信號）成為在顯微鏡下可識別的產物。對原位雜交反應信號進行顯示的方法因探針標記物不同而異。?? ?（一）放射性核素標記探針的檢測??? *個原位雜交實驗（1969年）以’H作為核酸探針的標記物，雜交信號用放射自顯影術檢測。隨著
生物芯片的檢測原理
雜交信號的檢測是DNA芯片技術中的重要組成部分。以往的研究中已形成許多種探測分子雜交的方法，如熒光顯微鏡、隱逝波傳感器、光散射表面共振、電化傳感器、 化學發光、熒光各向異性等等，但并非每種方法都適用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的結構及性質，需要確定雜交信號在芯片上的位置，尤其是大規模DNA芯
基因芯片檢測原理
雜交信號的檢測是DNA芯片技術中的重要組成部分。以往的研究中已形成許多種探測分子雜交的方法，如熒光顯微鏡、隱逝波傳感器、光散射表面共振、電化傳感器、化學發光、熒光各向異性等等，但并非每種方法都適用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的結構及性質，需要確定雜交信號在芯片上的位置，尤其是大規模DNA芯片由于
非同位素探針進行原位雜交實驗地高辛標記探針信號放大
試劑、試劑盒10μg ml 羊抗地筒辛抗體 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (組分V)地高辛信號放大溶液：3. 5?7. 0 ug ml熒光素標記的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (組分 V)儀器、耗材Parafilm 膜玻片實驗步驟1) 用
原子熒光檢測時無信號的原因以及解決方法
一、???? 無載氣或無屏蔽氣檢查氣路是否打開，確保壓力表主表壓力在2.0MPa以上，分壓表在0.2~0.3MPa之間。屏蔽氣與載氣接錯或爐芯破裂，兩氣混合。二、???? 氫化物反應沒有發生確保泵管路連接正確，壓管閥壓緊，泵管無破損漏液現象，硼氫化鉀要現用現配，仔細觀察反應塊內會有氣泡生成。三、??
雜交信號的放大實驗——生物素酰化信號
實驗材料雜交信號試劑、試劑盒生物素SSC熒光素親和素儀器、耗材離心機培養箱實驗步驟1. ?用生物素酰化探針與切片進行雜交、洗滌，進行第一輪雜交信號檢測。?2. ?如切片已承加蓋玻片并密封。可用一針頭或解剖刀片劃開密封的指甲油，移去蓋玻片， 并除去載玻片上指甲油。將玻片浸于0.1%Triton X-1
基因芯片的檢測原理
雜交信號的檢測是DNA芯片技術中的重要組成部分。以往的研究中已形成許多種探測分子雜交的方法，如熒光顯微鏡、隱逝波傳感器、光散射表面共振、電化傳感器、化學發光、熒光各向異性等等，但并非每種方法都適用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的結構及性質，需要確定雜交信號在芯片上的位置，尤其是大規模DNA芯片由于
熒光原位雜交和用引物介導的原位標記（PRINS）操作規程
儀器設備????1、?醫用微波爐；?????2、?水浴鍋；?????3、?OLYMPUS BX51熒光顯微鏡；?????4、?OLYMPUS DP11數字顯微照相機。FISH試劑????（1）1×PBS：由10×PBS溶液稀釋而成，儲存于4℃；?????（2）20×SSC（pH7.0）；?????（
熒光原位雜交和用引物介導的原位標記（PRINS）操作規程
儀器設備 ????1、?醫用微波爐； ?????2、?水浴鍋； ?????3、?OLYMPUS BX51熒光顯微鏡； ?????4、?OLYMPUS DP11數字顯微照相機。 FISH試劑 ????（1）1×PBS：由10×PBS溶液稀釋而成，儲存于4℃； ?????（2）20×SSC（pH7.0
分子雜交技術的核酸探針標記法
核酸探針根據核酸的性質，可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。 分子生物研究中，最常用的探針即為雙鏈DNA
細胞凋亡檢測實驗——熒光探針雙標記法
實驗方法原理本實驗用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導培養的HL-60細胞發生凋亡，同時也有少數細胞發生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）對細胞進行雙重染色，可以區別凋亡、壞死及正常細胞。三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病，
基因芯片檢測原理（二）
1．熒光標記雜交信號的檢測方法使用熒光標記物的研究者最多，因而相應的探測方法也就最多、最成熟。由于熒光顯微鏡可以選擇性地激發和探測樣品中的混合熒光標記物，并具有很好的空間分辨率和熱分辨率，特別是當熒光顯微鏡中使用了共焦激光掃描時，分辨能力在實際應用中可接近由數值孔徑和光波長決定的空間分辨率，而在傳統