層析(chromatography)是“色層分析”的簡稱。利用各組分物理性質的不同,將多組分混合物進行分離及測定的方法。有吸附層析、分配層析兩種。一般用于有機化合物、金屬離子、氨基酸等的分析。層析利用物質在固定相與流動相之間不同的分配比例,達到分離目的的技術。層析對生物大分子如蛋白質和核酸等復雜的有機物的混合物的分離分析有極高的分辨力。......閱讀全文
層析(chromatography)是“色層分析”的簡稱。利用各組分物理性質的不同,將多組分混合物進行分離及測定的方法。有吸附層析、分配層析兩種。一般用于有機化合物、金屬離子、氨基酸等的分析。層析利用物質在固定相與流動相之間不同的分配比例,達到分離目的的技術。層析對生物大分子如蛋白質和核酸等復雜的有
層析(chromatography)是“色層分析”的簡稱。利用各組分物理性質的不同,將多組分混合物進行分離及測定的方法。有吸附層析、分配層析兩種。一般用于有機化合物、金屬離子、氨基酸等的分析。層析利用物質在固定相與流動相之間不同的分配比例,達到分離目的的技術。層析對生物大分子如蛋白質和核酸等復雜
◆按層析的機理劃分: 吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析等。 吸附層析:利用吸附劑表面對不同組分吸附性能的差異,達到分離鑒定的目的。 分配層析:利用不同組分在流動相和固定相之間的分配系數不同,使之分離。 離子交換層析:利用不同組分對離子交換劑親和力的不同。 凝膠層
紙層析以濾紙為支持物的分配層析。組成濾紙的纖維素是親水物質,能形成水相和展層溶劑的兩相系統,被分離物質在兩相中的分配保持平衡關系。紙層析用于分析簡單的混合物時可做單向層析。對于復雜的混合物,可做雙向層析。1944年A.J.P.馬丁第一次用紙層析分析氨基酸,得到很好的分離效果,開創了近代層析的發展和應
反相層析在吸附層析中,高極性物質在層析柱上吸附較牢,洗脫時發生拖尾現象和保留時間長的問題。如果在支持物上涂上一層高碳原子的疏水性強的烷烴類,洗脫液用極性強的溶劑,如甲醇和水的混合物。則被分離樣品中的極性強的物質不被吸附,最先洗下來,得到較好的分離效果。這種層析法與普通的吸附層析法相反,故稱為反相層析
同系層析在核酸分析中,將樣品經核酸酶部分裂解成不同長度的核苷酸片段,用同位素標記后,在DEAE纖維素薄層上分離,用含有未標記的相同的核苷酸片段作展層溶劑,這樣,未標記的核苷酸把標記過的核苷酸推進,使按分子量大小不同把標記核苷酸片段,按由小到大的次序排列,達到分離的目的。于是把這種層析法稱為同系層析。
按層析的機理劃分:吸附層析、分配層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析等。吸附層析:利用吸附劑表面對不同組分吸附性能的差異,達到分離鑒定的目的。分配層析:利用不同組分在流動相和固定相之間的分配系數不同,使之分離。離子交換層析:利用不同組分對離子交換劑親和力的不同。凝膠層析:利用某些凝膠對于不同分
按操作形式劃分:柱層析、紙層析、薄層層析、高效液相層析等。柱層析:將固定相裝于柱內,使樣品沿一個方向移動而達到分離。紙層析:用濾紙做液體的載體,點樣后,用流動相展開,以達到分離鑒定的目的。薄層層析:將適當粒度的吸附劑鋪成薄層,以紙層析類似的方法進行物質的分離和鑒定。
層析須在兩相系統間進行。一相是固定相,需支持物,是固體或液體。另一相為流動相,是液體或氣體。當流動相流經固定相時,被分離物質在兩相間的分配,由平衡狀態到失去平衡到又恢復平衡,即不斷經歷吸附和解吸的過程。隨著流動相不斷向前流動,被分離物質間出現向前移動的速率差異,由開始的單一區帶逐漸分離出許多區帶,這
氣相層析屬于分配層析或吸附層析,僅適用于分析分離揮發性和低揮發性物質。固定相是在惰性支持物(如磨細的耐火磚)上覆蓋一層高沸點液體,如硅油、高沸點石蠟和油脂、環氧類聚合物。外涂層約為支持物重量的20%。分析時操作溫度范圍,一般從室溫到200℃。特殊的層析柱能達到500℃。流動相常用氦、氬或氮為展層氣體