亞細胞定位的GFP融合蛋白表達法
GFP是綠色熒光蛋白，在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發出綠色熒光，從而可以精確地定位蛋白質的位置。綠色螢光蛋白（GFP）是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。通過基因工程技術，綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組，在后代中持續表達，并且能根據啟動子特異性地表達。 使用GFP必須構建融合蛋白載體，并在轉染之后有效表達。這樣，若在熒光顯微鏡下看到細胞內某一部位存在GFP信號，說明和GFP融合的蛋白也存在于該部位，這樣就達到了確定某物質亞細胞定位的目的。......閱讀全文
亞細胞定位的GFP融合蛋白表達法
GFP是綠色熒光蛋白，在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發出綠色熒光，從而可以精確地定位蛋白質的位置。綠色螢光蛋白（GFP）是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。通過基因工程技術，綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組，在后代中持續表達，并且能根
綠色熒光蛋白(GFP)標記亞細胞定位
一、原理利用綠色熒光蛋白(GFP)來示蹤胞內蛋白的技術。利用GFP融合蛋白技術來進行活細胞定位研究是目前較為通行的一種方法，在光鏡水平進行研究，不需要制樣，沒有非特異性標記的影響。并且GFP的分子量為27kD，經激光掃描共聚集顯微鏡激光照射后，可產生一種綠色熒光，從而對蛋白質進行精確定位。激光掃描共
如何做蛋白亞細胞定位實驗？
生物功能的區域化是生命的一種基本現象，這種區域化是通過不同層次的系統組成，從器官到特異細胞，再到細胞內部的亞細胞結構，最后到大分子復合物。在細胞水平，蛋白在特定的時間和空間發揮作用，這種區域化的定位為蛋白發揮作用提供特定的化學環境以及所需的互作因子等。蛋白的錯誤定位容易導致細胞活動的紊亂。因此，了解
亞細胞定位的免疫熒光法介紹
1、直接法 將標記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標本上，經一定的溫度和時間的染色，用水洗去未參加反應的多余熒光抗體，室溫下干燥后封片、鏡檢。 2、間接法 如檢查未知抗原，先用已知未標記的特異抗體（第一抗體）與抗原標本進行反應，用水洗去未反應的抗體，再用標記的抗抗體（第二抗體）與抗原標本反應
新穎的融合蛋白表達系統
?研究者們在分離到某一基因后，要對其編碼蛋白質進行研究最理所當然的工作就是表達——即：有目的性地合成外源基因產物。在重組DNA技術的發展早期，人們認為在基因的前面有一個強啟動子和一個起始密碼子就足以在大腸桿菌中獲得很好的表達。隨后，認識到獲得有效的翻譯所需的條件要復雜得多，除了要有強啟動子和起始密碼
怎么亞細胞定位分析
用報告基因技術呀 比如說最常用的綠色熒光蛋白GFP或者改造過的EGFP等。和目的基因構建成為融合蛋白，轉入細胞中以后，用激光掃描共聚焦顯微鏡就可以觀察到基因的亞細胞定位
關于亞細胞定位的基本介紹
亞細胞定位是查找生物大分子在細胞內的具體存在的位置，如在核內、胞質內或者細胞膜上存在。常見的亞細胞定位方法有生物信息學預測法、免疫熒光法、GFP融合蛋白表達法。 不同的細胞器往往具有不同的理化環境，它根據蛋白質的結構及表面理化特征，選擇性容納蛋白。 蛋白質表面直接暴露于細胞器環境中，它由序列
有關融合蛋白表達載體的克隆
在構建融含蛋白表達載體時除了要注意插入片段的方向、讀碼框架與載體保持一致外，注意以下問題可能會減少一些不必要的麻煩，當外源片的插入載體起始密碼的后面，另一個基因的前面時，注意檢查插入后基因的兩端是否引入了新的終止密碼，特別是用到Klenow mung bean 核酸酶，T4 Polymerase
Science：首次揭示蛋白組亞細胞結構定位地圖
對于人細胞中的蛋白是如何在細胞中定位的首次分析于5月11日在線發表在Science上，這項研究，揭示了在給定的一個細胞中，大部分的人類蛋白被發現存在一個以上的定位位置。 基于瑞典的Cell Atlas計劃，研究人員檢查了對應大部分蛋白編碼基因的人類蛋白組的空間分布，空前地詳細描述了蛋白在多個細
iRNA干擾GFP表達實驗
【原理】RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特定基因的大約21堿基長短的雙鏈siRNAs(smallinte
iRNA干擾GFP表達實驗
實驗概要本文介紹了iRNA干擾GFP表達實驗的原理及方法步驟。實驗原理RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特
GST融合蛋白純化——篩選表達株
Purification of GST fusion proteins in?E.coli?GSTSugden lab,McArdle Laboratory for?Cancer Research?,University of Wisconsin-Madison Medical SchoolScre
目的基因在真核系統的表達及細胞內的定位實驗—熒光法
實驗方法原理綠色熒光蛋白（Green fluorecent protein，GFP）最早是在海洋生物水母（Aequorea victoria）中發現的。GFP 蛋白的多肽鏈中含有特殊的生色團結構，可在紫外光源下發出穩定的綠色熒光，而且這種熒光發射無需外加輔助因子或進行任何特殊處理。GFP 標記分子最
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含有重組硫
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒
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實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 氨芐青霉素甘油色氨酸儀器、耗材 電泳儀培養箱搖床試管實驗步驟 1. ?將編碼目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS質粒上的trxA基因3‘末端，構建符合讀框的融合基因，或者于pALtrxA-781的單一Rsr 2位點上插入短肽編碼序列。2. ?用含
揭秘：綿羊精卵融合的關鍵蛋白表達規律
近日，中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所肉羊遺傳育種科技創新團隊揭示了綿羊精卵融合關鍵蛋白表達規律，為進一步研究相關基因調控機制奠定了理論基礎。相關研究成果發表在《畜牧與生物技術雜志（Journal of Animal Science and Biotechnology）》上。 據儲明星研究員介
LSCM綠色熒光融合蛋白表達載體的構建
綠色熒光融合蛋白表達載體的構建?綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)?及其突變體能在各種不同的生物系統中表達，這對細胞生物學的研究具有重要意義。而熒光蛋白的折疊能力及其同細胞內蛋白的融合能力，使研究?者能直接在細胞體內觀察到蛋白質的特性。研究者不需要把蛋白質經過
生化與細胞所建立鑒定內質網跨膜蛋白拓撲結構的新方法
4月18日，國際學術期刊PLoS?One在線發表了中科院上海生命科學研究院生化與細胞所胡紅雨課題組的研究論文A Redox-Sensitive Luciferase Assay for Determining the Localization and Topology of Endoplasmi
桿狀病毒表達系統用于表達融合型蛋白的轉染質粒
是一類早期構建的轉染質粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每個載體中，多角體蛋白基因啟動子下游ATG啟始密碼后含有一個單一的BamHⅠ酶切位點，當外源基因和多角體基因的讀碼框架正確時，就可以獲得含1個或幾個多角體蛋白N端氨基酸的融合型外源基因。
首次在蛋白激酶組水平上描繪他們的亞細胞定位信息
浙江大學生命科學研究院趙斌實驗室于2021年5月14日在eLife上在線發表了題為《A subcellular map of the human kinome》的論文，首次在蛋白激酶組水平上描繪了他們的亞細胞定位信息。 蛋白質磷酸化是一種重要的蛋白質翻譯后修飾，它在包括代謝、增殖、分化、遷移等
LacZ和trpE融合蛋白的表達及純化實驗
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒氨芐青霉素IAAIPTGPBS鹽酸胍Tris·Cl儀器、耗材超聲波發生器透析袋轉子離心機實驗步驟利用pUR載體表達lacZ融合蛋白：?1a. ?按正確的讀框將目的基因亞克隆入pUR載體中，轉化大腸桿菌感受態細胞，在LB/氨芐青霉素平皿上挑選轉化子。2a. ?接種含表達載體
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實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 氨芐青霉素IAAIPTGPBS鹽酸胍Tris·Cl儀器、耗材 超聲波發生器透析袋轉子離心機實驗步驟 利用pUR載體表達lacZ融合蛋白：?1a. ?按正確的讀框將目的基因亞克隆入pUR載體中，轉化大腸桿菌感受態細胞，在LB/氨芐青霉素平皿上挑選轉化子。2a. ?接種含
LacZ和trpE融合蛋白的表達及純化實驗
基本方法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒
桿狀病毒表達系統用于表達多個非融合蛋白的轉染載體
這種載體的主要特征是含有2個或2個以上相同的啟動子，可表達2條或2條以上多肽鏈的蛋白。 如Emery和Bishop[8]等構建的pAcVC2轉染質粒，含有兩個方向相反的多角體基因啟動子。重組病毒可同時表達多角體蛋白和淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV） N蛋白。Takehara[9]等構
綠色熒光蛋白分子標記的研究
分子標記 作為一種新型的報告基因，GFP已在生物學的許多研究領域得到應用。利用綠色熒光蛋白獨特的發光機制，可將GFP作為蛋白質標簽（protein tagging），即利用DNA重組技術，將目的基因與GFP基因構成融合基因，轉染合適的細胞進行表達，然后借助熒光顯微鏡便可對標記的蛋白質進行細胞內
融合基因的表達物
融合基因的表達產物為融合蛋白。
棉花耐鹽相關基因－GhVP－的表達及功能分析
土壤鹽漬化是世界范圍內限制農作物產量和品質的重大問題。棉花是改良鹽堿地的先鋒作物。培育棉花耐鹽品種，開發利用大面積鹽堿地是棉花種植的必然趨勢，通過分子生物學手段挖掘棉花耐鹽相關基因，創新棉花種質資源，對棉花耐鹽性研究尤為重要。系統進化分析表明 GhVP 與鹽生植物鹽爪爪、灰綠藜的親緣關系最近，進一步
棉花耐鹽相關基因－GhVP－的表達及功能分析
土壤鹽漬化是世界范圍內限制農作物產量和品質的重大問題。棉花是改良鹽堿地的先鋒作物。培育棉花耐鹽品種，開發利用大面積鹽堿地是棉花種植的必然趨勢，通過分子生物學手段挖掘棉花耐鹽相關基因，創新棉花種質資源，對棉花耐鹽性研究尤為重要。系統進化分析表明 GhVP 與鹽生植物鹽爪爪、灰綠藜的親緣關系最近，進一步
Science：首次全方位揭示人類蛋白組亞細胞定位圖譜
導 語在亞細胞水平獲得蛋白質空間分布的準確信息對于理解蛋白質功能、相互作用及細胞活動機制具有重要意義。2017年5月11日，Science 雜志在線發表了瑞典皇家理工學院題為 A subcellular map of the human proteome的最新研究成果論文。研究者整合轉錄組、免疫熒光