關于免疫共沉淀的實驗過程介紹
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C， 最大轉速離心30 min后取上清；（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μl protein A 瓊脂糖珠，用適量裂解緩沖液洗3 次，每次3,000 rpm離心3 min；（4）將預處理過的10μl protein A 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與protein A瓊脂糖珠耦聯；（5）免疫沉淀反應后，在4°C 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩沖液洗3－4次；最后加入15μl的2×SDS 上樣緩沖液，沸水煮5分鐘；（6）SDS-PAGE, Western blotting或質譜儀分析。注意的問題......閱讀全文
關于免疫共沉淀的實驗過程介紹
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C， 最大轉速離心30 min后取上清；（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μl
免疫共沉淀的實驗過程介紹
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C， 最大轉速離心30 min后取上清； （2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜； （3）
免疫共沉淀的實驗過程
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C， 最大轉速離心30 min后取上清；（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μl
關于免疫共沉淀的實驗流程介紹
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C，最大轉速離心30 min后取上清； （2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4℃緩慢搖晃孵育過夜； （3）取1
免疫共沉淀的實驗過程和注意事項
（1）轉染后24-48 h 可收獲細胞，加入適量細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液于4°C， 最大轉速離心30 min后取上清；（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩余裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜；（3）取10μl
關于免疫共沉淀的試驗步驟介紹
1. 用預冷的PBS洗滌細胞兩次，最后一次吸干PBS； 2. 加入預冷的RIPA Buffer(1ml/107個細胞、10cm培養皿或150cm2培養瓶，0.5ml/5×106個細胞、6cm培養皿、75cm2培養瓶) 3. 用預冷的細胞刮子將細胞從培養皿或培養瓶上刮下，把懸液轉到1.5EP管
關于免疫共沉淀的實驗注意事項
(1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發生；(2) 要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀；(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。
免疫共沉淀實驗操作方法介紹
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。 2．將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以最大速度離心15 min。 3．收集上清（約30 ml）并加入30μg的適當抗體，4℃搖動免疫沉淀物1 h。 4．加入
關于免疫共沉淀的簡介
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法，是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經翻譯后修飾的，處于天然狀態的優點。 免疫共沉淀（Co -Immunoprecipitation
免疫共沉淀實驗方法
免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質x
免疫共沉淀的實驗原理簡介
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質
免疫共沉淀的原理介紹
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation），簡稱 Co-IP，其原理是當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來, 如果用蛋白質 X 的抗體?anti-X（通常稱為 IP 抗體）將 X 特異地抓住并沉淀下來，那么與 X 在體內結合的蛋白質
免疫共沉淀的優缺點介紹
優點： （1）相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的，處于天然狀態； （2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響； （3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。 缺點： （1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用； （2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結
免疫共沉淀
實驗概要本實驗以植物葉片為試材介紹了免疫共沉淀的基本方法。主要試劑50uM雌激素，液氮，提取緩沖液TBS(50mM Tris-Cl，0.15M NaCl，pH 7.4，1mM PMSF，5mM Benzamidine)，glycine-HCl，TBS，洗脫緩沖液(TBS，0.5mg/mL 3
免疫共沉淀實驗注意的問題有哪些？
注意的問題： （1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktaile
關于免疫應答的過程介紹
適應性免疫應答可分為三個階段： 1.識別階段：T細胞和B細胞分別通過TCR和BCR精確識別抗原，其中T細胞識別的抗原必須由抗原提呈細胞來提呈； 2.活化增殖階段：識別抗原后的淋巴細胞在協同刺激分子的參與下，發生細胞的活化、增殖、分化，產生效應細胞（如殺傷性T細胞）、效應分子（如抗體、細胞因子
免疫共沉淀溶液準備和實驗程序
1. 溶液準備：RIPA緩沖液：50mM Tris-HCl pH7.4 ，150mM NaCl ，1mM EDTA，1%Triton×100，1%去氧膽酸鈉，0.1%SDS，1mM PMSF，1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制劑 （ aprotinin ） ， 1μg/ml亮抑蛋白酶肽 （ leu
免疫共沉淀確定結合蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養基中生長的適宜細胞株 試劑、試劑盒 乙腈 考馬斯亮藍 R-250 EBC 裂解緩沖液
免疫共沉淀確定結合蛋白實驗
實驗材料 培養基中生長的適宜細胞株試劑、試劑盒 乙腈考馬斯亮藍 R-250EBC 裂解緩沖液NETN磷酸鹽緩沖溶液SDS 凝膠加樣緩沖液三氟乙酸胰蛋白酶胰蛋白酶消化緩沖液沉淀靶蛋白的抗體對照抗體不連續的 SDS-PAGE 梯度膠儀器、耗材 沸水浴蛋白質 A-Sepharose平板搖臺實驗步驟 材料緩
免疫共沉淀確定結合蛋白實驗
當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間結合保持下來。這一亊實可被用于檢測和確定生理條件下相關的蛋白質-蛋白質間相互作用。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料培養基中生長的適宜細胞株試劑、試劑盒乙腈考馬斯亮藍
免疫共沉淀－簡介
蛋白質間相互作用研究方法：免疫共沉淀1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養板上的適宜細胞。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中。2．將每毫升細胞懸液轉移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以最大速度離心15 min。3．收集上清（約30 ml）并加入30μg的適當抗體，4℃搖動免疫沉
免疫共沉淀概述
實驗概要本實驗以植物葉片為試材介紹了免疫共沉淀的基本方法。主要試劑50uM雌激素，液氮，提取緩沖液TBS(50mM Tris-Cl，0.15M NaCl，pH 7.4，1mM PMSF，5mM Benzamidine)，glycine-HCl，TBS，洗脫緩沖液(TBS，0.5mg/mL 3
免疫共沉淀技術
免疫沉淀可用于定位甲基化或轉錄因子結合的位置等DNA變化，但可能需要與假抗體進行斗爭。盡管ChIP-seq、DIP-seq和相關技術可以提供全基因組測定的相關信息，但它們并非總是有效。染色質免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation, ChIP）或DNA免疫沉淀（DNA
染色質免疫共沉淀技術（ChIP）－實驗
實驗概要染色體免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于體內分析發展起來的方法，也稱結合位點分析法，在過去十年已經成為表觀遺傳信息研究的主要方法。這項技術幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一特定位置會出現何種組蛋白修飾。ChIP不僅可以檢測體內反
免疫共沉淀（coIP）實驗案例分享
—— co-IP 檢測 Hsp90 與 Cdc37 結合情況1、實驗材料SKBR3 細胞，PMSF（Amresco，cat:329-98-6），cocktail（上海晶萊生物），脫脂奶粉（cat:66196131T），β-actin（上海晶萊生物）。Anti-Hsp90(santa,cat:
免疫共沉淀的方法特點和應用介紹
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agaros
關于克隆實驗的過程介紹
先將含有遺傳物質的供體細胞的核移植到去除了細胞核的卵細胞中，利用微電流刺激等使兩者融合為一體，然后促使這一新細胞分裂繁殖發育成胚胎，當胚胎發育到一定程度后，再被植入動物子宮中使動物懷孕，便可產下與提供細胞者基因相同的動物。這一過程中如果對供體細胞進行基因改造，那么無性繁殖的動物后代基因就會發生相
免疫共沉淀的技術缺點
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；（3）必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇最后檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉淀技術路線
準備工作：?預冷PBS，RIPA Buffer，細胞刮子（用保鮮膜包好后，埋冰下），離心機?1. 用預冷的PBS洗滌細胞兩次，最后一次吸干PBS；?2. 加入預冷的RIPA Buffer(1ml/107個細胞、10cm培養皿或150cm2培養瓶，0.5ml/5×106個細胞、6cm培養皿、75cm2
免疫共沉淀?試劑準備
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。試劑準備 ? 預