PCR實驗中DNA聚合酶的選擇及實驗方法
一、 DNA聚合酶的選擇實驗室常用 DNA聚合酶有三種：TaKaRa TaqTM，TaKaRa EXTaqTM和 PyrobestTMDNA Polymerase。TaKaRaTaqTM是一般的DNA 聚合酶，保真性較差，但價錢便宜，一般用于基因表達的檢測等。TaKaRaEXTaqTM是具有 Proof reading活性的耐熱性 DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其擴增得到的PCR產物 3’端附有一個 “A ”堿基，如果希望直接將產物克隆 到 T -vector可以用此酶。PyrobestTMDNA Polymerase 也是具有Proof reading 活性的耐熱性DNA 聚合酶，其特點是保真性極高，擴增得到的 PCR產物為平滑末端。如果進行基因的擴增 請使用此酶。二、按下列組成在PCR 反應管中調制反應液TaKaRaTaqTM或TaKaRaE XTaqTM的配方ReagentQuantity,for 50μ ......閱讀全文
PCR實驗中DNA聚合酶的選擇及實驗方法
一、?DNA聚合酶的選擇實驗室常用 DNA聚合酶有三種：TaKaRa TaqTM，TaKaRa EXTaqTM和 PyrobestTMDNA Polymerase。TaKaRaTaqTM是一般的DNA 聚合酶，保真性較差，但價錢便宜，一般用于基因表達的檢測等。TaKaRaEXTaqTM是具有 Pro
PfuDNA聚合酶PCR實驗方法介紹
General AdvicePCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this tec
基于－PCR－的－DNA－文庫篩選實驗方法
試劑、試劑盒 PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸 雜交寡核苷酸PCR 正對照PCR 主要混合物蒸餾水儀器、耗材 瓊脂糖凝膠電泳設備實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水2. 酶和酶緩沖液PCR 混合物（可以放在一起冰凍），對于 lml 反應，包括：200nmol 的各種 dNTP;1XVe
基于－PCR－的－DNA－文庫篩選實驗方法
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR 混合物 PCR 引物寡核苷酸 雜交寡核苷酸 PCR 正對照 PCR 主要混合物 蒸餾水
基于－PCR－的－DNA－文庫篩選實驗方法
試劑、試劑盒PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸雜交寡核苷酸PCR 正對照PCR 主要混合物蒸餾水儀器、耗材瓊脂糖凝膠電泳設備實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水2. 酶和酶緩沖液PCR 混合物（可以放在一起冰凍），對于 lml 反應，包括：200nmol 的各種 dNTP;1XVent 溶
知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將PC
T4－DNA聚合酶實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?Trish·CldNTPMgCl2BSADTT儀器、耗材?水浴鍋實驗步驟?一、50 μl 反應體積：（1）50 mmol/l? Tris·Cl，pH8.0（2）5 mmol/l? MgCl2（3）5mmol/l? DTT（4）100 μmol/l? 4dNTP混合液（5
T4－DNA聚合酶實驗
T4 DNA聚合酶 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
T4－DNA聚合酶實驗
T4 DNA 聚合酶具依賴人為模板的聚合酶活性，同時具有對單鏈、雙鏈DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。實驗材料DNA試劑、試劑盒Trish·CldNTPMgCl2BSADTT儀器、耗材水浴鍋實驗步驟一、50 μl 反應體積：（1）50 mmol/l ?Tris·Cl，p
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 樣品（即方案 2 第 16 步中的各消減樣品
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
在本方案所描述的反應中，差異 DNA 被選擇性地擴增。每個實驗至少應該有 4 個反應：①已消減的檢測 DNA;②未消減的檢測者對照（1-c);③反向消減的檢測 DNA;④反向未消減的對照（2-c)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑
耐熱DNA聚合酶的選擇
耐熱DNA聚合酶特點：合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。TIANGEN公司生產的耐熱DNA聚
PCR實驗中的污染預防及處理
? 一．污染的預防 ?????? 進行PCR 操作時，操作人員應該嚴格遵守一些操作規程，最大程度地降低可能出現的PCR 污染或杜絕污染的出現。 ?????? （一）劃分操作區：目前，普通PCR 尚不能做到單人單管，實現完全閉管操作，但無論是否能夠達到單人單管，均要求實驗操作在三個不同的區域內進行，P
Western實驗中內參基因的選擇及使用方法
相關專題western blot實驗western blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩
Western實驗中內參基因的選擇及使用方法
Western Blot實驗常用于檢測蛋白表達量、蛋白表達產物的正確性等。相對于其他檢測蛋白的方法而言Western Blot實驗在蛋白的定性定量分析、與目的蛋白量的比較方面更簡單一些。雖然，順利的時候Western blot做起來很簡單，可不順的時候也很令人心煩――做不出結果啦、假陽性啦、結果出現
聚合酶鏈式反應（PCR）實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 MgCl2DNA聚合酶BufferdNTP儀器、耗材 毛細管薄壁離心管PCR擴增儀瓊脂糖電泳實驗步驟 1、 反應體系： （反應溶液可置于毛細管或薄壁離心管中擴增）2、操作過程：（所用儀器為AMP1605熱循環PCR擴增儀預變性：94 ℃ 90秒循環過程：94 ℃ 1秒
聚合酶鏈式反應（PCR）實驗
PCR是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法。其特異性是由兩個人工合成的引物序列決定的。所謂引物就是與待擴增DNA片段兩翼互補的寡聚核苷酸，其本質是ssDNA片段。待擴增DNA模版加熱變性后，兩引物分別與兩條DNA的兩翼序列特異復性。此時，兩引物的3'端相對，5'向背。在合適的
聚合酶鏈式反應（PCR）實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 MgCl2 DNA聚合酶 Buffer dNTP
痘苗DNA檢測實驗——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脫水無水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打開 Eppendor
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
酚-氯仿法提取石蠟組織中 DNA 改進的石蠟切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰凍片 含血標本 胸腹水或尿液 ? ? ? ? ? ?
耐熱DNA聚合酶的選擇指南
耐熱DNA聚合酶特點：合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。TIANGEN公司生產的耐熱DNA聚
耐熱DNA聚合酶的選擇指南
一、耐熱DNA聚合酶特點合理選擇耐熱DNA聚合酶是PCR成敗與否的一個關鍵因素，如何選擇最合適的耐熱聚合酶，是進行PCR實驗首先要考慮的問題。目前市面上有許多耐熱 DNA聚合酶，雖然名稱各不相同，但主要區別在于特異性、保真性、耐熱性、擴增速率、擴增片段長度等幾個指標。TIANGEN公司生產的耐熱DN
用于PCR的模板DNA制備實驗——改進的石蠟切片－DNA－提取方法
實驗步驟1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上，常規烘片，脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 PCR 緩沖液ddH20基因組 DNAdNTP寡核苷酸引物儀器、耗材 離心機和轉子丙烯酸防護板過濾阻擋吸頭多道移液器PCR 儀托盤 固定器裝置底座管蓋小管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 緩沖液 (GeneAmpPCR 緩沖液
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
可以用各種方法分離基因組 DNA, 主要決定于初始材料的種類（血液還是組織）和數量。所有制備的 DNA 都應該儲存于 pH8.0 的 TE 緩沖液中并裝在滅菌的 Eppendorf 管內。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PCR 緩沖液ddH20基因組 DNA
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR 緩沖液 ddH20 基因組 DNA dNTP 寡核苷酸引物 儀器、耗材
實驗室中幾種常見的干燥方法及選擇技巧
實驗室中的干燥法沒有哪種最好，只有哪種最適合，不論哪種干燥方法都有其獨特的價值，都有其展現生命力的地方。一、真空干燥箱 原理：真空干燥箱專為熱敏性、易分解和易氧化物質及較復雜成分物品而設計，能夠向內部充入惰性氣體，特別是一些成分復雜的物品也能進行快速干燥。應用：應用于生物化學、化工制藥、醫療衛生、農
分子克隆實驗載體DNA的選擇
①質粒：質粒是細菌染色體外遺傳因子，DNA呈環狀，大小為1-200千堿基對(kb)。在細胞中以游離超螺旋狀存在，很容易制備。質粒DNA可通過轉化引入寄主菌。在細胞中有兩種狀態，一是“緊密型”；二是“松弛型”。此外還應具有分子量小，易轉化，有一至多個選擇標記的特點。質粒型載體一般只能攜帶10kb以下的