模板DNA的準備、實驗的組織和PCR擴增實驗
可以用各種方法分離基因組 DNA, 主要決定于初始材料的種類（血液還是組織）和數量。所有制備的 DNA 都應該儲存于 pH8.0 的 TE 緩沖液中并裝在滅菌的 Eppendorf 管內。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PCR 緩沖液ddH20基因組 DNAdNTP寡核苷酸引物儀器、耗材離心機和轉子丙烯酸防護板過濾阻擋吸頭多道移液器PCR 儀托盤 固定器裝置底座管蓋小管實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 緩沖液 (GeneAmpPCR 緩沖液 I，AppliedBiosystems)滅過菌的 ddH202. 酶和酶緩沖液TaqDNA 聚合酶，(AppliedBiosystems 或 Invitrogen)3. 核酸和寡核苷酸基因組 DNA10 mmol/L dNTP(GeneAmpPCRdNTP 混合物，AppliedBi......閱讀全文
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 PCR 緩沖液ddH20基因組 DNAdNTP寡核苷酸引物儀器、耗材 離心機和轉子丙烯酸防護板過濾阻擋吸頭多道移液器PCR 儀托盤 固定器裝置底座管蓋小管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑含 15 mmol/LMgCl2 的 10XPCR 緩沖液 (GeneAmpPCR 緩沖液
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
可以用各種方法分離基因組 DNA, 主要決定于初始材料的種類（血液還是組織）和數量。所有制備的 DNA 都應該儲存于 pH8.0 的 TE 緩沖液中并裝在滅菌的 Eppendorf 管內。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒PCR 緩沖液ddH20基因組 DNA
模板－DNA－的準備、實驗的組織和－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR 緩沖液 ddH20 基因組 DNA dNTP 寡核苷酸引物 儀器、耗材
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
酚-氯仿法提取石蠟組織中 DNA 改進的石蠟切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰凍片 含血標本 胸腹水或尿液 ? ? ? ? ? ?
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脫水無水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打開 Eppendor
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 樣品（即方案 2 第 16 步中的各消減樣品
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
在本方案所描述的反應中，差異 DNA 被選擇性地擴增。每個實驗至少應該有 4 個反應：①已消減的檢測 DNA;②未消減的檢測者對照（1-c);③反向消減的檢測 DNA;④反向未消減的對照（2-c)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq?DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
高GC比模板的PCR擴增
PCR條件的優化是一個麻煩耗時的過程，涉及到溫度、時間、鎂離子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多個因素的調整。一般來說利用熱啟動，比如Platinum Taq DNA聚合酶（Invitrogen）可以達到更高的特異性，降低對鎂離子濃度的依賴，并且有利于提高“問題模板”的產量。然而，傳統的PCR條件
PCR擴增模板和抗體可變區基因的擴增
PCR?擴增模板和抗體可變區基因的擴增???? 如果構建Fab抗體庫,必需利用RT-PCR獲取抗體基因;構建ScFv抗體庫,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在構建小鼠ScFv抗體庫過程中,主要采用DNA作為擴增模板。?【材料和試劑】（1）PCR儀（2）Taq酶（3）氯仿（4）瓊脂糖?【
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗——冰凍片
實驗步驟1. 將 10 μl 冰凍切片直接放入含組織裂解液的離心管中。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。3. 其間用指輕彈離心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μ
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗——含血標本
實驗步驟1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的無菌離心管（15 ml 管）中。2. 2000 r/min 離心 10 min。吸去血漿，用指彈勻剩余的有核細胞和紅細胞，加入紅細胞溶解液 10 ml 并混勻，常溫下放置 30 min。紅細胞溶解液配
用于PCR的模板DNA制備實驗——直接法（DNA－免提法）
實驗步驟1. 標本太少時，可將一張石蠟切片經脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。2. 加入 20～80 μl 直接裂解液中，加 20 mg/ml 蛋白酶 K 0.2～1 μl，放置 55℃ 裂解 3 h 以上；100℃10 min 滅活蛋白酶 K；10000 r/min 離心 10
PCR擴增DNA（PCR－Amplify－DNA）實驗原理、材料和操作步驟
【實驗原理】聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是一種體外 DNA擴增技術，1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中，將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍，具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點，目前已成為分子生物學及基因工程中極為
用于－PCR－的模板－DNA－制備實驗——胸腹水或尿液
實驗步驟1. 標本 10 ml 以上，2000 r/min 離心 10 分鐘，倒去上清液。用指彈勻沉淀物，加入適量組織裂解液，37℃ 下放置半小時以上。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55
用于PCR的模板DNA制備實驗——改進的石蠟切片－DNA－提取方法
實驗步驟1. 5 μm 厚的石蠟切片 5 至 10 張貼在干凈的載玻片上，常規烘片，脫蠟，水化，蒸餾水清洗，無菌蒸餾水浸泡，取出晾至半干。2. 無菌尖頭刀片刮下，放入 300～900 μl 組織裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
基因的PCR擴增實驗擴增不出DNA條帶是什么原因
可能有很多原因，最常見的原因是1.模板不干凈，2.引物設計不當，3.退火溫度過高，等等
用于PCR的模板DNA制備實驗——酚氯仿法提取石蠟組織中DNA
模板 DNA 質量直接影響 PCR 結果，是 PCR 成功的關鍵之一。根據其檢測對象（組織細胞材料）的不同，有不同的制備方法，常用的材料有石蠟切片、冰凍切片、血細胞、胸腹水等。實驗步驟1. 10 mm 厚石蠟切片 10～15 張，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脫蠟 二甲
制備DNA測序模板實驗
制備單鏈M13噬菌體DNA 小量裂解物中制備λ噬菌體DNA 雙脫氧測序的雙鏈質粒DNA的堿變性 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
制備DNA測序模板實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材 巴斯德吸管試管離心機實驗步驟 1. ?如果起始用M13復制型DNA或M13單鏈DNA，以0.5 ng 重組M13mp復制型DNA或5~10 ng 單鏈DNA轉化40 μl ?感受態大腸桿菌DH5αF'株
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
實驗材料 樣品試劑、試劑盒 雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀器、耗材 加濕盒熱循環儀實驗步驟 1. ?將載有固定樣品的載玻片置105℃加熱塊上5~120 s。?2. ?載玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室溫溫育過夜，以滅活內源性過氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術，就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
利用血清篩選噬菌體文庫PCR擴增的模板
[器材和試劑] ●MicroAmp反應管（PerkinElmer） ●洗脫緩沖液（20mmol/LTris—ClpH8．5，2mmol/LEDTA，1％TritonX—100） ●GeneAmp9600PCR儀（PerkinElmer） ●正向引物：5’—AGAGATTA
PCR擴增分離目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分
PCR基因擴增實驗
[實驗目的]通過本實驗學習PCR反應的基本原理與實驗技術。[實驗原理]多聚酶鏈式反應（polymerase chain reaction,PCR）的原理類似于DNA的天然復制過程。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物，經變性、退火和延伸若干個循環后，DNA擴增2n倍。1．變性：加
多重－PCR－擴增實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 多重PCR（multiplex PCR），其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同。一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定。重PCR的特點有：①高效性在同一PCR反應管內同時
多重－PCR－擴增實驗
試劑、試劑盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物儀器、耗材 熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 酶和酶緩沖液Taq 聚合酶許多 Taq 聚合酶都可以用；作者發現 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以滿足大多數需要. 如果需要提高PCR 產物的特異性，應該使用熱啟動聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附帶的
多重－PCR－擴增實驗
多重PCR擴增實驗可以用于：（1）在同一PCR反應管內同時檢出多種病原微生物，或對有多個型別的目的基因進行分型，特別是用一滴血就可檢測多種病原體；（2）多重PCR很適宜于成組病原體的檢測，如肝炎病毒，腸道致病性細菌，性病，無芽胞厭氧菌，戰傷感染細菌及細菌戰劑的同時偵檢；（3）多種病原體在同一反應管內