創建輕鏈改組噬菌體文庫
[器材和試劑]● PCR試劑和設備● 含有起始scFV基因的載體pHENl單鏈模板DNA（50ng/ul）● Geneclean試劑盒● Wlzard PCR純化試劑盒● scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT GCC-3'● scFvJH3XhoFOR引物： 5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAT TGT CCC3'● scFvJH4-5XhoF（）R引物：5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT TCC-3'● scFvJH6XhoFOR引物： 5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC G......閱讀全文
創建輕鏈改組噬菌體文庫
[器材和試劑] ●? PCR試劑和設備 ●? 含有起始scFV基因的載體pHENl單鏈模板DNA（50ng/ul） ●? Geneclean試劑盒 ●? Wlzard PCR純化試劑盒 ●? scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC
噬菌體肽文庫的定義
中文名稱噬菌體肽文庫英文名稱phage peptide library定 義將編碼多肽的外源基因插入含噬菌體外殼蛋白基因的載體，構建得到能與外殼蛋白融合表達多肽的基因文庫。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
噬菌體文庫的擴增實驗
實驗材料?噬菌體試劑、試劑盒?MgSO4麥芽糖瓊脂糖氯仿DMSOSM儀器、耗材?離心機分光光度計水浴鍋實驗步驟 1.? 制備鋪平板菌（1）2.5 ml 新鮮過夜培養的宿主菌液接種于250 ml 含0.2%麥芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培養液中。（2）在37℃恒溫搖床劇烈搖蕩2~4 h，
什么是噬菌體肽文庫？
中文名稱噬菌體肽文庫英文名稱phage peptide library定 義將編碼多肽的外源基因插入含噬菌體外殼蛋白基因的載體，構建得到能與外殼蛋白融合表達多肽的基因文庫。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
噬菌體文庫的擴增實驗
文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但在擴增時由于克隆的生長速率不同，文庫的組成可能會出現某種潛在的改變。這種文庫克隆組成比率的變化可以通過把文庫克隆預吸附到細菌上并使用一種高密度鋪平板和短期培養的方法而盡量減少。文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但
噬菌體文庫的擴增實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體 試劑、試劑盒
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
可利用合成雙鏈寡核苷酸篩選構建于λ噬菌體的 cDNA 表達文庫，以鑒定與特異 DNA 結合蛋白質相對應的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒ATP結合緩沖液變性溶
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP 結合緩沖液 變性溶液 二硫蘇糖醇 EDTA 乙醇激酶 連接酶緩沖液 酚 氯
文庫甘油儲存料中噬菌體抗體的制備
實驗概要本實驗從文庫甘油儲存料中制備了噬菌體抗體。主要試劑1. 2×TY/amp/glu培養基2. TYE/amp/glu平板3. 含有25ug/ml卡那霉素和2％葡萄糖的TYE平板(TYE/kan/glu)4. 含100ug/ml氨芐青霉素和25ug/ml卡那霉素的2×TY培養基(2×TY/amp
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
試劑、試劑盒 ATP結合緩沖液變性溶液二硫蘇糖醇EDTA乙醇激酶 連接酶緩沖液酚氯仿篩選緩沖液SDS醋酸鈉TET4 噬菌體 DNA 連接酶T4 噬菌體多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非變性聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 烤盤結晶皿平頭鑷子裝有防水黑墨水注射器硝酸纖維素濾膜Sephadex G
文庫甘油儲存料中噬菌體抗體的制備
實驗概要本實驗從文庫甘油儲存料中制備了噬菌體抗體。主要試劑1. 2×TY/amp/glu培養基2. TYE/amp/glu平板3. 含有25ug/ml卡那霉素和2％葡萄糖的TYE平板(TYE/kan/glu)4. 含100ug/ml氨芐青霉素和25ug/ml卡那霉素的2×TY培養基(2×TY/amp
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
實驗材料 噬菌體試劑、試劑盒 瓊脂糖LBNaOHSSCTris·Cl儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱實驗步驟 1. ?通過系列等比稀釋滴定噬菌體文庫的滴度。?2. ?重組噬菌體與鋪平板的宿主菌混合于培養試管中（表一），于37 ℃溫育20 min。?表一、噬菌體文庫鋪平板組分最佳配制方法?3. ?按每個
利用血清篩選噬菌體文庫PCR擴增的模板
[器材和試劑] ●MicroAmp反應管（PerkinElmer） ●洗脫緩沖液（20mmol/LTris—ClpH8．5，2mmol/LEDTA，1％TritonX—100） ●GeneAmp9600PCR儀（PerkinElmer） ●正向引物：5’
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗
在典型的免疫篩選實驗中，λ噬菌體表達載體構建的文庫應鋪在不含異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大腸桿菌菌株的平板上。誘導物的缺少保證了噬菌斑順利形成前不產生對宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，將平板從 42°C 移到 37°C 以穩定溫度敏感型的所有融合蛋白。本實驗來源于分子克隆實驗指
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 IPTG 抗原-抗體復合物檢測試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液 放射
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗（二）
方法λ噬菌體的平板培養1. 取適當大腸桿菌菌株的單克隆進行接種，按第 2 章方案 1 介紹的方法制備用于鋪平板的培養細菌。2. 假定每個 90 mm 平皿和 150 mm 平皿分別可長出 2X104 個和 5X104 個噬菌斑，計算篩選文庫所需平皿數。對應每個平皿準備一個無菌試管（13 mm
篩選構建于λ噬菌體載體的表達文庫實驗（一）
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿IPTG抗原-抗體復合物檢測試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液放射性碘標記第二抗體第一抗體LB 瓊脂板LB 頂層瓊脂板硝酸纖維素濾膜λ噬菌體表達文庫E.coli儀器、耗材 預設 42°C 的空氣培養箱培養管平頭鑷子裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器實驗步
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗——基本方案
文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但在擴增時由于克隆的生長速率不同，文庫的組成可能會出現某種潛在的改變。這種文庫克隆組成比率的變化可以通過把文庫克隆預吸附到細菌上并使用一種高密度鋪平板和短期培養的方法而盡量減少。實驗材料噬菌體試劑、試劑盒瓊脂糖LBNaOHSSCTris·C
平衡法選擇高親和力噬菌體抗體
[器材和試劑]?● 鏈霉親和素磁珠（DynabeadsM280,Dynal）?● 磁性1.5ml試管架（Dynal）?● 磷酸鹽緩沖液（PBS）?● 2%脫脂奶粉PBS（2%MPBS）?● 生物素化試劑盒?● 含0.1為Tween-20的PBS（PBS/Tween）?● 100mmol/L HCI?
抗原抗體反應抗體基因文庫
抗體基因文庫（antibody recombination library）是將不同的重鏈和輕鏈基因隨機組合，克隆到合適的表達載體中，在原核細胞表達不同的抗體，形成一個抗體庫，從這個抗體庫中，用抗原可以篩選到相應的抗體基因。抗體基因來源于雜交瘤細胞或動物B細胞（免疫或未免疫）的DNA和mRNA。
克隆免疫反應因子的基因法制備催化抗體的方法介紹
通過PCR技術克隆出全套免疫球蛋白的可變區基因，建立單獨產生重鏈和輕鏈的噬菌體文庫，然后再通過每個載體中存在的非對稱限制位點使它們隨機地將基因的輕重鏈結合，這些含有上百萬個高水平表達的輕鏈和重鏈片段的文庫在大腸桿菌中表達和組裝，就可大量制造Fab片斷了。這樣的文庫在保留親本單克隆的識別和親和特性
克隆免疫反應因子的基因制備抗體酶的介紹
通過PCR技術克隆出全套免疫球蛋白的可變區基因，建立單獨產生重鏈和輕鏈的噬菌體文庫，然后再通過每個載體中存在的非對稱限制位點使它們隨機地將基因的輕重鏈結合，這些含有上百萬個高水平表達的輕鏈和重鏈片段的文庫在大腸桿菌中表達和組裝，就可大量制造Fab片斷了。這樣的文庫在保留親本單克隆的識別和親和特性
再擴增VH基因文庫添加3‘限制性位點并克隆創建VH基因節...
再擴增VH基因文庫添加3‘限制性位點并克隆創建VH基因節段文庫[器材和試劑]● PCR試劑和設備● Wlzard PCR純化試劑盒（Promega）● PVHlOR2引物： 5'-GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC TCG CGC GCA GTA ATA CAC
CDNA文庫
?CDNA文庫（主要內容如下）·?????????Construction of cDNA Library·?????????Construction of Genome DNA Library·?????????Library Screening??OthersConstruction of cD
Dharmacon文庫在RNAi文庫篩選的應用
1.什么是文庫？――大幅提高研究效率的利器以往的實驗室研究中，無論是尋找新基因的功能、探索已知基因致病的機制、解析復雜信號通路網絡、探索疾病發生發展的機制，藥物敏感性測試或者是尋找藥物開發的新靶點，科研工作者們往往是圍繞著潛在的單個目標基因進行改造，包括針對該基因的過表達、沉默、敲除、激活、修飾、突
被“輕食”搞大了肚子，輕食真的“輕”嗎？
這幾年減肥的人是越來越多，在意飲食健康的人也越來越多，于是乎，一種新型餐飲“輕食”就成為了資本的弄潮兒。 所謂的輕食，就是輕熱量，輕烹飪，輕負擔的一種流行的新餐飲品類，但是我調查了一圈輕食店和很多輕食外賣，卻發現： 輕食一點都不輕。 很多不僅不健康，甚至容易讓人發胖。 而很多所謂的新消費
噬菌體展示技術與抗體藥物研發
2018年諾貝爾化學獎塵埃落定，授予Frances Arnold、George Smith、Gregory Winter三人。其中化學獎一半的獎金授予美國科學家Frances Arnold，獎勵她的工作實現了酶的定向進化；另一半的獎金授予英國科學家Gregory Winter以及美國科學家Geo
cDNA文庫構建
cDNA文庫構建 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 cDNA 文庫是指某生物某發育時期所轉錄的全部 mRNA 經反轉錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。
cDNA文庫構建
cDNA文庫[原理]：cDNA文庫不同于基因組文庫，被克隆DNA是從mRNA反轉錄來源的DNA。CDNA組成特點是其中不含有內含子和其他調控序列。從而做cDNA克隆時應是先從獲得mRNA開始，在此基礎上，通過反轉錄酶作用產生一條與mRNA相互補的DNA鏈，然后除掉mRNA，以第一條DNA鏈為模板復制