脂染介導的DNA轉染實驗
下述方法是 Mark Evans 所研究的一種方法的改進（Alexion Pharmaceuticals,New Haven,Connecticut)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養物試劑、試劑盒脂染試劑NaCl枸櫞酸鈉質粒 DNA純化閉環質粒 DNA細胞生長培養基儀器、耗材試管聚苯乙烯或聚丙烯試管組織培養皿實驗步驟材料緩沖液與溶液貯存溶液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。將貯存液稀釋成適當濃度。脂染試劑NaCl(5mol/L)(選用）用于稀釋 DOGA。枸櫞酸鈉（pH5.5,20 mmol/L) 含 150 mmol/LNaCl(選用）DOGS 用作脂染試劑時，可用于代替滅菌水稀釋質粒 DNA（Kichler et al.1998)。核酸與寡核苷酸質粒 DNA如果是第一次用脂染或使用不熟悉的細胞系，應使用編碼大腸桿菌β-葡萄糖醛酸酶或者......閱讀全文
脂染介導的－DNA－轉染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養物 試劑、試劑盒 脂染試劑 NaCl 枸櫞酸鈉
脂染介導的－DNA－轉染實驗
下述方法是 Mark Evans 所研究的一種方法的改進（Alexion Pharmaceuticals,New Haven,Connecticut)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養物試劑、試劑盒脂染試劑N
生物粒子介導的－DNA－轉染實驗
下面是拫據 Horch 等（1999)、Sanford 等（1993)、主要基因槍生產商的出版物（US/EG Bulletins 1688 and 2087;Bio-Rad) 以及 Steve Finkbeiner(University of California,San Francisco) 建立
生物粒子介導的－DNA－轉染實驗
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 生物粒子介導的 DNA 轉染實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 CaCl2 乙醇
生物粒子介導的－DNA－轉染實驗
試劑、試劑盒 CaCl2乙醇甘油亞精胺質粒DNA細胞生長培養基儀器、耗材 基因槍金或鎢粒子鏡頭紙微量離心管需轉染的細胞或組織實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄1。稀釋貯存液至所需濃度CaCl2(2.5mol/L)乙醇未曾打開過的純乙醇一瓶。乙醇有吸濕性，在空氣中會吸收水分。在
脂質體介導DNA轉染法
脂質體（LR）試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下最方面的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞
磷酸鈣介導的質粒－DNA－轉染真核細胞實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞試劑、試劑盒 CaCl2氯喹Giemsa 染液甘油HEPES 鹽緩沖液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉TE質粒 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿（60 mm) 或 12 孔板實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需濃度。CaCl
磷酸鈣介導的質粒－DNA－轉染真核細胞實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞 試劑、試劑盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
磷酸鈣介導的質粒－DNA－轉染真核細胞實驗
本方法中介紹的磷酸鈣介導的質粒 DNA 轉染貼壁細胞是對 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改進。Jordan 等大大優化了磷酸鈣介導的中國倉鼠卵巢細胞與人胚腎 293 細胞的轉染方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數
脂質體介導的細胞轉染實驗
實驗概要學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法—脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和病毒介導法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入；磷酸鈣法和脂
脂質體介導的真核細胞轉染實驗
脂質體介導短暫表達 脂質體進行穩定轉染 哺乳動物細胞的選擇標記 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 哺乳動物細胞
脂質體介導的真核細胞轉染實驗
實驗材料 哺乳動物細胞試劑、試劑盒 質粒DNA完全培養基氯化銫DMEM儀器、耗材 培養皿培養箱聚苯乙烯管實驗步驟 1. ?按5×105細胞/孔的量在六孔板中接種指數期生長的細胞，在37℃ 5%CO2培養箱中 培養過夜，直至細胞80%匯片。（如果用100 mm 培養皿代替六孔扳，則培養細胞至80%匯片
磷酸鈣介導的真核細胞轉染實驗——高效轉染法
實驗材料真核細胞試劑、試劑盒完全培養液TEBES儀器、耗材培養箱平板實驗步驟1. ?轉染前一天接種呈指數生長的細胞，密度為5×105/10 cm ?平板。加10 ml 完全培養液，在開始轉染時細胞數應＜106/平板，以留足夠供細胞擴增至少2倍的表面積。2. ?用TE緩沖液稀釋質粒DNA至1 μg/μ
脂質體介導的真核細胞轉染實驗——質體介導短暫表達
用脂質體將DNA導人各種真核細胞的效率比其他轉染方法更高，重復性更好。實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒質粒DNA完全培養基氯化銫DMEM儀器、耗材培養皿培養箱聚苯乙烯管實驗步驟1. ?按5×105細胞/孔的量在六孔板中接種指數期生長的細胞，在37℃ 5%CO2培養箱中 培養過夜，直至細胞80%匯片。
脂質體介導的真核細胞轉染實驗——脂質體進行穩定轉染
實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒DMEM儀器、耗材培養箱離心管實驗步驟1. ?接種細胞（見“脂質體介導短暫表達”步驟1）長至50%匯片。?2. ?制備DNA/脂質體混合物，轉染細胞（見“脂質體介導短暫表達”步驟2和3）。3. ?每孔細胞加入1 ml DMEM-20完全培養液，37℃ 培養箱培養48
磷酸鈣介導的真核細胞轉染實驗
磷酸鈣法 高效轉染法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 真核細胞 試劑、試劑盒
磷酸鈣介導的真核細胞轉染實驗
實驗材料 真核細胞試劑、試劑盒 CaCl2HEPES緩沖液氯化銫PBS儀器、耗材 培養箱錐形管離心管實驗步驟 1. ?在轉染前一天將細胞分入10 cm 組織培養平板中。當被轉染的細胞是貼壁細胞，倍增時間為18~24 h時，一般按1：15從長滿的培養皿中分細胞效果較好，轉染的當天，細胞應在培養
電穿孔轉染－DNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液 試劑、試劑盒 Giemsa 染液 甲醇 磷酸鹽緩沖液
電穿孔轉染－DNA－實驗
電穿孔可以有效地轉染磷酸鈣-DNA 沉淀物等其他方法轉染效果不好的細胞系。但是，與其他轉染方法一樣，未使用過的細胞系進行電穿孔轉染的實驗條件要經過優化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒Giem
電穿孔轉染－DNA－實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養液試劑、試劑盒 Giemsa 染液甲醇磷酸鹽緩沖液丁酸鈉載體 DNA細胞生長培養基儀器、耗材 組織培養皿基因脈沖器 II電穿孔設備與電轉化池Sorvall H1000B 轉子或類似設備實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需
磷酸鈣介導的高分子量基因組－DNA－轉染細胞實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養物試劑、試劑盒 CaCl2甘油HEPES 鹽緩沖液異丙醇NaCl基因組 DNA帶有選擇性標志的質粒細胞生長培養基儀器、耗材 聚乙烯試管Shepherd’s crook組織培養皿實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所濃度。Ca
磷酸鈣介導的高分子量基因組－DNA－轉染細胞實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞培養物 試劑、試劑盒 CaCl2 甘油 HEPES 鹽緩沖液
磷酸鈣介導的高分子量基因組－DNA－轉染細胞實驗
下述方法是對 Graham 與 Van der Eb(1973) 建立的磷酸轉方法的改進，用高分子量基因組 DNA 代替了質粒 DNA。這一方法對建立穩定的攜帶補充宿主染色體基因突變的轉染基因的細胞系尤其有用（Segeetal.1984,Kingsley et al.1986)。本實驗來源于分子克隆
利用－Polybrene－進行－DNA－轉染實驗
實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞試劑、試劑盒 DMSO(30%) 含血清培養基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸鈉要轉染的 DNA儀器、耗材 最低基礎培養基組織培養皿實驗步驟 材料緩沖液與溶液貯存液、緩沖液與試劑的成分見附錄 1。稀釋貯存液至所需濃度。DMSO(30%)/含血清培養基第 3
利用－Polybrene－進行－DNA－轉染實驗
下面講述的 Polybrene 與 DMSO 轉染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改進。利用此方法可以有效地將質粒 DNA 轉染中國倉鼠卵巢細胞與角化細胞，產生的轉化體比磷酸鈣-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 時兩種方法的轉染效率無明顯差別。本實驗來源于分子克
利用－Polybrene－進行－DNA－轉染實驗
利用 Polybrene 進行 DNA 轉染實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 指數生長的哺乳動物細胞
脂質體介導的瞬時轉染
? ? ? ? ? ? 實驗材料 靶細胞 DNA 試劑、試劑盒 陽離子脂質 D-PBSA緩沖鹽溶液 Na
脂質體介導的瞬時轉染
實驗材料?靶細胞DNA試劑、試劑盒?陽離子脂質D-PBSA緩沖鹽溶液NaCl 0.25%胰蛋白酶儀器、耗材?細胞培養基還原的血清培養基無血清培養基多孔培養板實驗步驟 A . 貼壁細胞的轉染1. 將 1.3X105 個細胞/孔接種到 6 孔培養板，加 3 ml 培養基。2. 于 37°C 的 CO2
脂質體介導的瞬時轉染
實驗材料靶細胞DNA試劑、試劑盒陽離子脂質D-PBSA緩沖鹽溶液NaCl0.25%胰蛋白酶儀器、耗材細胞培養基還原的血清培養基無血清培養基多孔培養板實驗步驟A . 貼壁細胞的轉染1. 將 1.3X105?個細胞/孔接種到 6 孔培養板，加 3 ml 培養基。2. 于 37°C 的 CO2?孵箱培養至
DNA轉染
DNA轉染·?????????Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)·?????????Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents?(PDF)