制備DNA測序模板實驗——制備單鏈M13噬菌體DNA
本實驗包含了用于制備適用于雙脫氧測序的模板及適用于末端標記和化學測序的DNA的實驗方案。所有用于雙脫氧測序的雙鏈模板在與引物退火前必須變性，在一般應用上，堿變性在測序中的效果比熱變性好。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1. 如果起始用M13復制型DNA或M13單鏈DNA，以0.5 ng 重組M13mp復制型DNA或5~10 ng 單鏈DNA轉化40 μl 感受態大腸桿菌DH5αF'株，按熱休克方案進行轉化。2. 轉化細胞加0.2 ml大腸桿菌DH5αF'過夜培養物后，混勻于3 ml H頂層瓊脂，傾倒于37℃平板，倒扣后置于37℃過夜。3. 大腸桿菌DH5αF'過夜培養物以2×TY培養液稀釋100倍，分裝于18 mm×150 mm 試管，每份1.5 ml。 4. &nbs......閱讀全文
胸腺DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了濃鹽法小牛胸腺DNA制備的原理及操作步驟。實驗原理DNA在生物體內是以與蛋白質形成復合物的形式存在的，因此提取出脫氧核糖核酸蛋白復合物（DNP）后，必須將其中的蛋白質除去。小牛胸腺，魚類精子和植物種子的胚等含有豐富的DNA，可作為提取DNA的良好材料。動物和植物組織的脫氧核糖核蛋
酵母DNA微量制備
實驗概要本實驗介紹了分別從40ml和5ml酵母培養液中制備酵母DNA的操作流程。實驗步驟1. 酵母DNA微量制備(40ml)?? 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量(過夜)。?? 2) 將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS-
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
酵母菌DNA制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材?玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1.? 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2.? 將1.5 ml 的過夜培養
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
DNA芯片的制備方式
DNA芯片又叫做基因芯片（gene chip）或基因微陣列（microarray），寡核酸芯片，或DNA微陣列，它是通過微陣列技術將高密度DNA片段陣列以一定的排列方式使其附著在玻璃、尼龍等材料上面。由于常用計算機硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
酵母DNA的小量制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。
制備互補DNA的方法
制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原)，則可從沉淀
質粒DNA的小量制備
實驗概要本方法用于從細菌中制備提純少量質粒DNA。主要試劑1. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris．Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 溶液Ｉ可成批配制，每瓶約100ml，在6.895×104Pa高壓下蒸氣滅菌15分鐘，貯存于4℃。2. 溶液Ⅱ 0.2
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理 通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料 酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒 異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液T
質粒DNA的大量制備
實驗概要本方法用于從細菌中提純大量質粒DNA。主要試劑1. STE 0.1mol/L NaCl 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 2. 溶液Ｉ 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(
酵母DNA的小量制備
實驗方法原理通過消化細胞壁，然后用 SDS 裂解隨之產生的原生質體就可以制備酵母 DNA。用這種方法可重復性地制備若干毫克的酵母 DNA。得到的酵母 DNA 可被限制性內切核酸酶切割，也可用作 PCR 的模板。實驗材料酶解酶 100T酵母細胞試劑、試劑盒異丙醇醋酸鉀SDS醋酸鈉山梨糖醇緩沖液TE酵母
快速制備酵母DNA法
實驗概要本實驗制備了酵母轉化質粒，快速從轉化酵母菌中分離了用于Southern分析的基因組DNA。主要試劑2％ Triton X－100，1％SDS，100mmol/L NaCl，10mmol/L Tris-HCl(pH8)，1mmol/L Na2EDTA，苯酚：氯仿：已戊醇（25：24：1），YP
“DNA探針”的制備過程
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別
DNA片段的制備方法
常用以下方法獲得DNA片段：①用限制性核酸內切酶將高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超聲波)取得DNA隨機片段；③在已知蛋白質的氨基酸順序情況下，用人工方法合成對應的基因片段；④從mRNA反轉錄產生cDNA。
λ噬菌體DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了λ噬菌體DNA的制備、操作步驟和注意事項。實驗原理λ噬菌體是最早使用的克隆載體，λ噬菌體的基因組是一長度約為50kb的雙鏈DNA分子，它在宿主細胞有兩種生活途徑：其一是裂解生長，環狀DNA ? 分子在細胞內多次復制，合成大量噬菌體基因產物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次
DNA探針的制備方法
基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細菌為例，細菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針，通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法，即將細菌DNA切成小片段后（如用限制性內切酶做不完全水解）分別
制備DNA測序模板實驗——小量裂解物中制備λ噬菌體DNA
實驗材料重組λ噬菌體試劑、試劑盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA異丙醇乙酸鈉TE儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1. ?在新鮮配制的λ頂層瓊脂糖和λ瓊脂糖平板上，通過在平板上裂解適于λ噬菌體生長的大腸桿菌菌株，制備重組λ噬菌體毒種原液。2. ?取700 μl 毒種液加入無菌的1.5
制備DNA測序模板實驗——制備單鏈M13噬菌體DNA
本實驗包含了用于制備適用于雙脫氧測序的模板及適用于末端標記和化學測序的DNA的實驗方案。所有用于雙脫氧測序的雙鏈模板在與引物退火前必須變性，在一般應用上，堿變性在測序中的效果比熱變性好。實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1
鮭精擔體DNA制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 鮭精DNA
質粒DNA的大量制備實驗
堿裂解法 氯化銫/溴化乙錠平衡離心法 層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制
DNA－芯片的制備與應用
DNA 芯片的制備與應用DNA 芯片的出現，是生物技術領域的一次革命，雖然現在無法預知它帶給我們的變化。但由于它在人類基因組計劃，基因表達和藥物篩選等方面的潛在用途。目前已有越來越多的公司和研究機構加入到DNA芯片的設計與開發。DNA芯片技術集成了集成電路制造，照相平板印刷，DNA合成，探針的熒光標
鮭精擔體DNA制備實驗
利用這一方案可獲得剪切好的高質量鮭精擔體DNA，它可用于轉化實驗和其他需要高質量擔體DNA的實驗中。實驗材料鮭精DNA試劑、試劑盒TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材離心機搖床超聲儀實驗步驟1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后
制備DNA測序模板實驗
制備單鏈M13噬菌體DNA 小量裂解物中制備λ噬菌體DNA 雙脫氧測序的雙鏈質粒DNA的堿變性 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
質粒DNA的小量制備實驗
堿裂解小量制備法 煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
質粒DNA的大量制備實驗
實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制備也簡單易行，但得到的DNA比較粗制。高純度的質粒DNA可通過氯化銫/溴化乙錠平衡離心法或層析法進一步純化粗制DNA得到。實驗材料 培養基菌株試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇乙酸鉀異丙醇儀器、耗材 離心管實驗
鮭精擔體DNA制備實驗
實驗材料 鮭精DNA試劑、試劑盒 TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材 離心機搖床超聲儀實驗步驟 1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后，用攪拌棒于4℃攪拌過夜，最終獲得一種均勻粘稠液體。?2. ?將一個較大的超聲波探頭插入燒杯
DNA－親和介質的制備實驗
試劑、試劑盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸銨乙醇酚 氯仿氯仿 異戊醇NaOAcT4 DNA連接酶酚異丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸鉀KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶緩沖液TE接頭-激酶緩沖液乙醇胺-
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 培養基試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇VTE儀器、耗材 平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于5 ml無菌LB培養液中，在37°C培養至飽和狀態（過夜）。2. ?取1.5 ml培養液以最大轉速離心20 S。棄上清。3. ?沉淀用10