酵母菌DNA制備實驗1
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。 2. 將1.5 ml 的過夜培養物轉移到微量離心管中，室溫高速離心5 s，倒掉上清，快速振蕩分散沉淀物。 3. 細胞用200 μl 破菌緩沖液重懸，加0.3 g 玻璃珠（約200 μl 體積）及200 μl 酚/氯仿/異戊醇，在漩渦混合器上高速振蕩2 min，室溫高速離心5 min。 4. 取1~2 μl 水相轉化感受態大腸桿菌只HB101或MH1，涂布在帶有合適的抗生素的LB平板上以質粒上的抗藥性標志進行選擇。展開......閱讀全文
酵母菌DNA制備實驗1
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. ?注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。?2. ?將1.5 ml 的過夜培養物轉移
酵母菌DNA制備實驗2
實驗材料酵母試劑、試劑盒TERNA酶乙酸銨無水乙醇儀器、耗材離心機培養箱玻璃培養管實驗步驟1. ?在18 mm×150 mm 無菌玻璃培養管或17 mm×100 mm 無菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培養基過夜培養酵母菌至靜止期。2. ?培養物室溫下在臺式離心機上1 200 g 離心5 min
酵母菌DNA制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材?玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1.? 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2.? 將1.5 ml 的過夜培養
酵母菌RNA制備實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材 離心管離心機搖床實驗步驟 1. ?酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期（OD600=1.0）。?2. ?將培養液轉移到50 ml，離心管，于4℃，1 500 g 離心3 min。?3. ?棄上清，菌體沉淀用1 ml 冰冷的水
酵母菌的培養實驗1
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒葡萄糖儀器、耗材搖床錐形瓶離心機實驗步驟1. ?在30℃，氧氣充足和以葡萄糖作碳源的條件下，野生型釀酒酵母菌生長得十分良好。當酵母菌在試管中培養時，接種酵母菌貯液后應輕輕振蕩培養液以便菌體細胞分散均勻。2. ?在作大體積液體培養時，酵母菌在錐形瓶中生長較好，使用瓶底具隔板的
酵母菌RNA制備實驗—poly（A）+法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酚氯仿異戊醇儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟一、熱酸酚方案（基本方案1）1. ?TES及酸酚溶液的體積增加到4 ml。2. ?操作時使用50 ml 聚丙烯離心管。3. ?將得到大約10 mg RNA。?二、玻璃珠方案（備擇方案1）1. ?將體積增加到15 ml
質粒DNA大量制備實驗
堿裂解法 平衡離心法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。
質粒DNA大量制備實驗
實驗方法原理?這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相當決捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒?葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS異丙醇乙醇乙酸甲儀器、耗材?離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟?1.? 往2 ml 燒瓶中加入500 ml ，含有適當抗生素的L
酵母菌RNA制備實驗—玻璃珠法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酚氯仿異戊醇儀器、耗材玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟1. ?培養并收集酵母菌細胞，冷凍細胞沉淀。2. ?用300 μl RNA緩沖液中重懸細胞沉淀。?3. ?加1體積冷的酸洗玻璃珠（體積與約200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA緩沖液平衡的25：24 ：1酚/
酵母菌基因組DNA的提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌 試劑、試劑盒
酵母菌基因組DNA的提取實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 SE緩沖液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K緩沖液 Tris儀器、耗材 高速冷凍離心機臺式離心機恒溫水浴低溫冰箱冷凍真空干燥器取液器電泳儀水平電泳槽紫外觀測儀實驗步驟 1. ?1.5 ml ?對數生長期細菌細胞。2. ?離心，12 000 rpm，1-2 min。3.
哺乳動物中制備基因組DNA實驗——制備DNA
在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續的實驗打下基礎。一般真核細胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織、培養細胞或低溫保存的組織細胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提而實現的。實驗材料動物組織試劑、
酵母菌RNA制備實驗—熱酸性酚抽提法
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒TES酸性酚氯仿乙酸鈉乙醇儀器、耗材離心管離心機搖床實驗步驟1. ?酵母細胞在10 ml 培養基中生長至指數中期（OD600=1.0）。?2. ?將培養液轉移到50 ml，離心管，于4℃，1 500 g 離心3 min。?3. ?棄上清，菌體沉淀用1 ml 冰冷的水重懸，轉
質粒DNA的大量制備實驗
堿裂解法 氯化銫/溴化乙錠平衡離心法 層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制
質粒DNA的小量制備實驗
堿裂解小量制備法 煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
質粒DNA的大量制備實驗
實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制備也簡單易行，但得到的DNA比較粗制。高純度的質粒DNA可通過氯化銫/溴化乙錠平衡離心法或層析法進一步純化粗制DNA得到。實驗材料 培養基菌株試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇乙酸鉀異丙醇儀器、耗材 離心管實驗
DNA－親和介質的制備實驗
試劑、試劑盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸銨乙醇酚 氯仿氯仿 異戊醇NaOAcT4 DNA連接酶酚異丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸鉀KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶緩沖液TE接頭-激酶緩沖液乙醇胺-
制備DNA測序模板實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材 巴斯德吸管試管離心機實驗步驟 1. ?如果起始用M13復制型DNA或M13單鏈DNA，以0.5 ng 重組M13mp復制型DNA或5~10 ng 單鏈DNA轉化40 μl ?感受態大腸桿菌DH5αF'株
DNA－親和介質的制備實驗
DNA 親和介質的制備實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 培養基試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇VTE儀器、耗材 平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于5 ml無菌LB培養液中，在37°C培養至飽和狀態（過夜）。2. ?取1.5 ml培養液以最大轉速離心20 S。棄上清。3. ?沉淀用10
鮭精擔體DNA制備實驗
實驗材料 鮭精DNA試劑、試劑盒 TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材 離心機搖床超聲儀實驗步驟 1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后，用攪拌棒于4℃攪拌過夜，最終獲得一種均勻粘稠液體。?2. ?將一個較大的超聲波探頭插入燒杯
質粒DNA的小量制備實驗——
實驗采用國產的質粒小量抽提試劑盒。它是一種新型的離子交換柱，在特定的條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間，結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。實驗材料DNA試劑、試劑盒LB培養基卵清溶菌酶異丙醇TE儀器、耗材離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟一、實驗步驟1. ?接種一
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 細菌克隆試劑、試劑盒 LB培養基抗生素葡
鮭精擔體DNA制備實驗
利用這一方案可獲得剪切好的高質量鮭精擔體DNA，它可用于轉化實驗和其他需要高質量擔體DNA的實驗中。實驗材料鮭精DNA試劑、試劑盒TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材離心機搖床超聲儀實驗步驟1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后
鮭精擔體DNA制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 鮭精DNA 試劑、試劑盒
制備DNA測序模板實驗
制備單鏈M13噬菌體DNA 小量裂解物中制備λ噬菌體DNA 雙脫氧測序的雙鏈質粒DNA的堿變性 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
DNA轉化實驗指導1
CONTENT?Transformation-Competent?E. coli?preparation???Inoue "ultra-competent" methodRubidium chloride methodCosmid packaging protocol?DNA Ligation an
質粒DNA的小量制備實驗——煮沸小量制備法
實驗方法原理當菌體在NaOH和?SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。推薦采用本方案從1-24個菌落培養液中制備少量的質粒DNA，盡管該方案十分快捷，但制備的DNA的
細菌中制備基因組DNA實驗——小量制備
真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。實驗方法原理提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液
DNA熒光染色的樣品制備實驗
試劑、試劑盒PBS儀器、耗材DNA熒光染料流式細胞儀實驗步驟DNA是細胞內含量比較恒定的參量，隨著細胞增殖周期的各時相而發生變化。熒光染料（如PI）可選擇性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的雙螺旋堿基之間，與細胞特異性結合，DNA含量與熒光染料的結合量成正比，因此通過測定熒光強度可獲知細胞的增殖情況