質粒DNA的轉化
實驗概要本實驗將人Bcl-2重組質粒轉化DH5α擴增菌，轉化后在含Amp的培養基上進行篩選，生長的菌落即為含重組質粒的工程菌。含人Bcl-2重組質粒的DH5α菌用于質粒DNA的擴增，獲得的質粒將作為限制性內切酶的酶切底物DNA。實驗原理轉化是將外源DNA分子導入到受體細胞，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。轉化所用的受體細胞一般是限制-修飾系統缺陷變異株，即不含限制性內切酶和甲基化酶（R-，M-）。將對數生長期的細菌（受體細胞）經理化方法處理后，細胞膜、的通透性發生暫時性改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞。進入受體細胞的DNA分子通過復制和表達實現信息的轉移，使受體細胞具有了新的遺傳性狀。將經過轉化的細胞在篩選培養基上培養，即可篩選出轉化子（帶有異源DNA分子的細胞）。本實驗采用CaCl2法制備感受態細胞。其原理是細胞處于0～4℃，CaCl2低滲溶液中，大腸桿菌細胞膨脹成球狀。轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-......閱讀全文
質粒DNA的制備和純化
實驗概要質粒（plasmid）是一種染色體外的穩定遺傳因子，大小從1~200kb不等，為雙鏈、閉環的DNA分子，并以超螺旋狀態存在于宿主細胞中。質粒主要發現于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復制和轉錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數，并表達所攜帶的遺傳信息。質粒在細胞內的復制一般有兩種類型：
質粒DNA的提取與純化
一、實驗目的與原理?質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。?提取質粒的基本步驟分為三步：?①細菌的培養和質粒的擴增?②細菌菌體的裂解?③質粒DNA的純化?本實驗采取的菌體
細菌質粒－DNA－的小量制備
實驗方法原理 由于大腸桿菌染色體 DNA 比通常用作載體的質粒 DNA 分子大得多，因此在提取過程中，染色體 DNA 易斷裂成線型 DNA 分子，而大多數質粒 DNA 則是共價閉環型，根據這一差異便可以設計出各種分離、提純質粒 DNA 的方法。堿裂解法就是基于線型的大分子染色體 DNA 與小
堿裂解法提取質粒DNA
實驗目的1、掌握最常用的提取質粒DNA的方法和檢測方法；2、了解制備原理及各種試劑的作用。實驗原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。細菌質粒是一類雙鏈、閉環
質粒DNA的小量快速提取
實驗概要本實驗介紹了質粒DNA小量快速提取的基本原理及操作步驟。實驗原理在堿性條件下，染色體DNA和質粒DNA都發生變性，但質粒DNA的超螺旋共價閉合環狀結構的兩條互補鏈不會完全分離，當用酸性的高鹽緩沖液將pH中和至中性時，變性的質粒DNA又恢復到原來的構型并溶解在溶液中，而染色體DNA不能復性而形
質粒DNA導入細菌細胞實驗
實驗材料 菌落質粒DNA試劑、試劑盒 CaCl2儀器、耗材 培養基平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于50 ml LB培養液中，于37°C中速搖床培養過夜（250 r/min)。2. ?往一個2 L的燒瓶中加人400 ml LB培養液，再加入4 ml過夜培養液，于37°C搖床（250 r/min）
質粒DNA導入細菌細胞實驗
CaCl2轉化法 一步法制備和轉化感受態細菌實驗 電轉化法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 菌落 質粒DNA
質粒DNA的提取與純化
一、實驗目的與原理質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。提取質粒的基本步驟分為三步：①細菌的培養和質粒的擴增，②細菌菌體的裂解，③質粒DNA的純化。本實驗采取的菌體裂解方
質粒和DNA有什么不同
質粒是一種可以獨立復制的DNA片段，通常以環狀的形式存在，同時有線性和超螺旋狀態，而DNA是脫氧核糖核酸的英文簡稱，是由核苷酸聚合而成的，其中基因就是DNA的一種，可以調控蛋白質的表達和生物機體功能
小量制備質粒DNA(強堿法)
實驗概要本文介紹了強堿法小量制備質粒DNA的原理及操作流程。有助于了解基因工程操作中運載基因的載體，掌握最常用的提取質粒DNA的方法。實驗原理堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA的變性與復性的差異而達到分離的目的。利用溶菌酶、強堿(NaOH)及表面活性劑(SDS)使細胞破壁、膜，釋放出胞內染色體D
質粒DNA的提取與鑒定
本實驗采取堿裂解法的方法來提取質粒 ，之后經瓊脂糖凝膠電泳來檢測DNA。質粒DNA 的提取與鑒定(一)堿裂解法提取質粒[實驗原理]堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個狹窄的范圍內,線性的DNA雙螺旋結構解開而被變
柱離心法純化質粒DNA
實驗概要本實驗介紹了柱離心法純化質粒DNA的原理及操作流程。實驗原理1. 離心柱結構：特殊硅基質吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質穿過。在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對有序排列，形成了疏水環境。在此環境中
堿裂解法提取質粒DNA
實驗概要本實驗介紹了堿裂解法提取質粒DNA的實驗原理和操作步驟。實驗原理堿裂解法是一種應用最為廣泛的制備質粒DNA的方法，堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大
Omega質粒DNA中量提取流程
實驗概要Omega質粒DNA中量提取試劑盒中文說明書(E.Z.N.A. EndoFree Plasmid Midi Kit I)。主要試劑1. 使用前，將RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。2. 按下表用無水乙醇稀釋DNA Wash Buffer，并于室溫保存。??? D691
質粒DNA的雙酶切
實驗概要掌握質粒DNA雙酶切的原理和操作方法。實驗原理分子生物學實驗中，基因的重組與分離涉及到一系列的酶促反應。許多種酶在基因克隆實驗中有著廣泛的用途。限制性內切酶是一類能識別雙鏈DNA分子特異性核酸序列的DNA水解酶。多種細菌能合成限制性核酸酶，這是它們保護自己，降解外來DNA分子的重要手段。每一
Omega質粒DNA中量提取流程
實驗概要Omega質粒DNA中量提取試劑盒說明書(E.Z.N.A. EndoFree Plasmid Midi Kit)。主要試劑1. 使用前，將RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。2. 按下表用無水乙醇稀釋DNA Wash Buffer，并于室溫保存。??? D6915-01
DNA的酶切與連接——質粒DNA酶切
DNA的連接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸內切酶切割DNA和利用DNA連接酶連接DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一；（2）成功的酶切和有效的連接為后續的外源基因進入宿主細胞進行表達提供了有效的實驗材料。實驗方法原理限制性內切酶能夠特異性地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗——煮沸裂解法小量制備質粒DNA
這個方法 [ 根據 Holmes 和 Quigley 的方法（1981) 修訂而成 ] 是將細菌懸浮于含有 Triton X-100 和能消化細胞壁的溶菌酶的緩沖液中，然后加熱到 100℃ 使其裂解。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等實驗方法原理經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗——煮沸裂解法大量制備質粒DNA
實驗方法原理經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從大量（500 ml ) 細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒通過柱層析或 CsCl-溴化乙錠梯度離心可進一步純化。試劑、試劑盒抗生素乙醇異丙醇乙酸鈉STETTE溶菌酶儀器、耗材LB、YT 或 Terrific 培養液沸水浴實驗步驟一
牙簽法小量制備質粒DNA實驗
用牙簽從瓊脂培養基上挑取的菌落可直接用于制備質粒 DNA。所得的閉合環狀 DNA 往往雜質太多，不能作為大多數限制酶的底物。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理用牙簽從瓊脂培養基上挑取的菌落可直接用于制備質粒 DNA。所得的閉合環狀 DNA 往往雜質太多，不能作為大多數限制酶
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
牙簽法小量制備質粒DNA實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用牙簽從瓊脂培養基上挑取的菌落可直接用于制備質粒 DNA。所得的閉合環狀 DNA 往往雜質太多，不能作為大多數限制酶的底物。 試劑、試劑盒
重組質粒(dna－recombinant－plasmid)的連接
質粒具有穩定可靠和操作簡便的優點。如果要克隆較小的DNA 片段( ＜10kb) 且結構簡單，質粒要比其它任何載體都要好。在質粒載體上進行克隆，從原理上說是很簡單的，先用限制性內切酶切割質粒DNA 和目的DNA 片段，然后體外使兩者相連接，再用所得到重組質粒轉化細菌，即可完成。但在實際工作中，
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這種溫和的方法（改進自
質粒DNA的提取與電泳鑒定
質粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術，但提取方法有很多種，以下介紹一種最常用的方法：堿裂解法：此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養基。2、37℃振蕩培養過夜。3、取1.5
質粒DNA的分離、純化和鑒定
材料、設備及試劑 一、材料 含質粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料離心管(又稱eppendorf管),離心管架。 二、設備 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 臺式高速離心機，恒溫振蕩搖床， 高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋)， 渦旋振蕩器， 電泳儀，瓊脂糖平板
牙簽法小量制備質粒DNA實驗
實驗方法原理 用牙簽從瓊脂培養基上挑取的菌落可直接用于制備質粒 DNA。所得的閉合環狀 DNA 往往雜質太多，不能作為大多數限制酶的底物。試劑、試劑盒 抗生素溴酚藍溶液EDTA溴化乙錠NSS 溶液KCl瓊脂糖凝膠儀器、耗材 LB、YT 或 SOB熱循環儀木質牙簽實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液(
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
實驗方法原理 這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。試劑、試劑盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
細菌質粒－DNA－的小量制備實驗
細菌質粒的發現是微生物學對現代分子生物學發展的重要貢獻之一。特別是自 70 年代末以來，根據質粒分子生物學特性而構建的一系列克隆和表達載體更是現代分子生物學發展、改良生物品種和獲得基因工程產品不可缺少的分子載體，發展十分迅速，而質粒的分離和提取則是最常用和最基本的實驗技術，其方法很多。僅大腸桿菌質粒
如何判斷提取質粒DNA的純度
可以通過紫外吸收檢測。因為核酸的最大吸收波長為260nm，蛋白質為280nm，在波長260nm時，1OD值相當于雙鏈DNA濃度為50μg/ml，單鏈寡核苷酸的含量為30μg/ml，可以據此來計算核酸樣品的濃度,還可通過測定在260nm和280nm得OD值的比值，估計核酸的純度。純凈DNA的比值為1.