TRIzolPrep
Procedure1. Homogenize cells (10 million) or tissue (50-100 mg) in 1 mL TRIzol Reagent (e.g. scrape and pass through 30G needle, dounce homogenize and pass through needle, or use a homogenizer) and transfer to a 1.5 mL tube. Optional - Spin at 12k g for 10' at r.t. to pellet debris. Save pink supernatant in fresh tube.2. Incubate 5' at r.t.3. Add 0......閱讀全文
TRIzol－Prep
Procedure1.? Homogenize cells (10 million) or tissue (50-100 mg) in 1 mL?TRIzol Reagent?(e.g. scrape and pass through 30G needle, dounce homogenize an
RNA－Extraction－(mini－prep):Trizol法實驗原理和步驟
RNA的制備與分析對于了解基因在轉錄水平上的表達與調控和cDNA的合成都是必須的，RNA的純度和完整性對于Northern blot，RT-PCR 和cDNA文庫的構建等分子生物學實驗都至關重要。RNA分離的方法很多，其中最關鍵的因素是盡量減少RNA酶的污染 實驗原理： ?Trizol 試劑
Studier－Lysate－Prep
Summary How to make a lysate from a plaque preparation. We also use this protocol for preparation of a quick stock from previously made lysate prep.
CHO－Centrosome－Prep
CHO Centrosome Prep:Arshad Desai4/94Cells:We grow our CHOs with MEM[[alpha]] (without nucleosides) + 10% Bovine Calf Serum and penn/strep/glutamine. F
Yeast－DNA－Prep
Protocolgrow up yeast culture to appropriate density (near saturation)spin 1.5 mls of culture for 1 min in microfuge and aspirate off supernatantresus
Competent－agro－prep－for－electroporation
day 1 1. Start 75 mL overnight cultures of agro (strain GV3101 C58C1 Rifr pMP90 Gmr, Koncz & Schell) in YEP in 250 mL baffle flasks. 2. Grow at
Yeast－Genomic－DNA－Prep
Grow 10ml YPD cultures o/n. Figure out cell density; inoculate 30 ml YPD and grow o/n so that cell density is approximately 2 x 108cells/ml the next
Streptomyces:Protocols/Spore－Prep
Spore Prep - Inoculating & Harvesting Description? A spore prep is a method of preserving a sporulating strain of Streptomyces. The stock is stored
porcine－brain－tubulin－prep
Although many protocols for tubulin preparation are available, the procedure described below is the simplest and highest yielding preparation I have d
CSF－Extract－Prep－for－Spindle－Assembly
This protocol is essentially as described by Murray (1991), Cell Cycle Extracts. In Methods in Cell Biology, B.K. Kay and B. Peng, eds. (San Diego: A
Acid－Phenol－Yeast－RNA－Prep
This is the preferred method for yeast RNA preparationuse Gloves and RNAse free solutions throughout.1. Use a YPD overnight culture to innoculate fres
TRIzol－RNA提取方法
研究基因的表達和調控時常常要從組織和細胞中分離和純化RNA。TRIzol RNA提取方法：（1）操作簡單的，提取方便，回收率高； （2）提取的RNA的質量高，對cDNA庫，RT-PCR和Northern?Blot等分子生物學實驗起著很重要的影響。實驗方法原理Trizol是一種新型總RNA抽提試劑，采
TRIzol－RNA提取方法
（一）試劑準備1．TRIzol試劑。2．氯仿3．異丙醇4．75%乙醇（DEPC H2O配制）5．DEPC H2O（二）操作步驟1． 樣品處理：（1）培養細胞：收獲細胞1-5×107，移入1.5ml離心管中，加入1ml Trizol，混勻，室溫靜置5min。（2）組織：取50-100mg組織（新鮮或-
TRIzol－RNA提取方法
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Trizol是一種新型總RNA抽提試劑，采用變性劑即內含異硫氰酸胍酚和β-巰基乙醇等變性物質，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶。異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質，并使蛋白質二級結構消失，細胞結構
Streptomyces:Protocols/MiniMaxi－Prep
Small Scale Plasmid Isolation (Mini / Maxi Prep)Description?A mini prep / maxi prep is used to isolate plasmid or cosmid DNA from bacteria, normally E
TritonPrep－Method－for－bacterial－DNA－Purification
Triton-Prep Method for bacterial DNA PurificationGrow 5 ( large scale-15ml culture). Harvest in single eppendorf tube (or 15 ml disposable tube).Resus
RNA－extraction－using－trizol/tri
RNA extraction with TRIzol (Invitrogen product name) or the equivalent TRI (Sigma-Aldrich product name) is a common method of total?RNA extraction?fro
使用－Trizol－純化－RNA－實驗
RNA 分離的酚基試劑的生產以 Chomczynski 方案為基礎。這些方案在從富含 RNA 酶的組織如胰腺中獲取 RNA 時最有用。這里介紹的是隨 Invitrogen 的 Trizol 試劑出售的方案的摘要，經 Invitrogen 允許做了修改。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：
使用－Trizol－純化－RNA－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 磨細的組織 試劑、試劑盒 Trizol 氯仿 異丙醇 乙醇
總RNA提取（Trizol提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA 制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA 時，將儲存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase 的作用。1. 提取組織RNA 時，每50～100mg 組織用1ml
使用－Trizol－純化－RNA－實驗
實驗材料 磨細的組織試劑、試劑盒 Trizol氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑Trizol(Invitrogen)氯仿異丙醇乙醇，75%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 處理過的水配制DEPC 處理過的水2. 細胞和組織50~100 mg 已磨細的組織二、方法1
DNA抽提指南(TRIZOL)
按照RNA 分離操作方案在完全移去水樣層后，勻漿中的DNA 存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來。在沉淀和多次洗脫后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL試劑從組織和培養細胞中完全回收的DNA 可以用來做樣品中DNA 含量的測定。同時抽提的基因組DNA 可以用于對Northern a
TRIZOL提取注意事項
警告: 有毒物接觸皮膚或者不慎吞服。會導致灼傷。一旦接觸皮膚后立即以大量的洗滌劑和清水清洗。若感不適，看醫生并尋求苯酚和其他成分(JTSRN 80100437-5000p)的正確治療方案。）? TRIZOL在室溫下能穩定保存12個月。盡管如此，為達到最佳效果，我們建議保存在2—8°C的環境下。一般描
TRIzol有無毒性
TRIzol有毒性，trizol中含有苯酚，苯酚是刺激性氣味。對呼吸道有傷害，聞久了會有暈的感覺。1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質解聚得到釋放。2、苯酚雖可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰
蛋白抽提指南（TRIZOL）
在用酒精沉淀出DNA（DNA抽提中的步驟一）后剩余的苯酚—乙醇上清中可以抽提出蛋白。沉淀的蛋白可通過蛋白[質]印跡法對樣品中某一特殊的蛋白質進行分析。試劑所需，但沒有隨同提供的物品：* 異丙醇* 0.3M鹽酸胍(用95%酒精配制)* 無水乙醇* 1% SDS1.蛋白質的沉淀用異丙醇從苯酚—乙醇上清中
A－quick－RNA－miniprep－for－Neurospora－mycelial－cultures
Most RNA isolation techniques currently in use have been developed for the processing of large quantities of material. These typically involve multip
PREP自動酶切儀使用方法
一 開機前檢查：1 檢查儀器臺面（DECK）上所有的實驗材料（Labware）。2 檢查SystemWater 水桶的水位。3 檢查恒溫循環水浴（Chiller）水箱的水位，并定期更換或填充Chiller 中的循環水。4 倒掉廢液桶中的廢液。二 開機步驟：打開Chiller、Heater、儀器及計算
RNA抽提指南(TRIZOL法)
RNA抽提指南(TRIZOL法)注意事項：* 全程佩戴一次性手套。皮膚經常帶有細菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來源。培養良好的微生物實驗操作習慣預防微生物污染。* 使用滅菌的，一次性的塑料器皿和自動吸管抽提RNA，避免使用公共儀器所導致的RNA酶交叉污染。例如，使用RNA探針的實驗室
TRIZOL提取注意事項2
實驗所需但試劑未提供的物品：* 氯仿 *異丙醇* 75%乙醇(用DEPC處理過的水配制)*無RNA酶的水或0.5% SDS溶液［配無RNA酶的水，將水加入無RNA酶的玻璃瓶中，加入DEPC至0.01% (v/v)。放置過夜并高壓滅菌。SDS溶液必須用DEPC處理過并經高壓滅菌的水配制。］1.勻漿化作
TRIZOL提取注意事項3
3.臺式離心機最大能達到2,600×g的離心力，如果將離心時間延長到30-60分鐘可以滿足步驟2和步驟3中的操作。疑難解答：RNA抽提每1 mg組織或1×106培養細胞預期的RNA產量1.肝和脾，6—10μg2.腎，3—4μg3.骨骼肌和腦組織，1—1.5μg4.胎盤，1-4μg5.上皮細胞(1×1