細胞系錯誤鑒定:終結的開始(三)
交叉污染檢測許多方法已被用來檢測交叉污染,包括同工酶分析、核型分析、人類白細胞抗原(HLA)分型,免疫分型和DNA指紋識別。這些方法都可以鑒別出某一種細胞系,但是分辨能力各不一樣。然而,這些方法在不同實驗室所得到的數據卻不盡相同,以致沒有任何一種方法可以用來建立一個標準參考數據庫。許多實驗室利用STR分型來鑒定人源細胞系。STR分型是一種用來做親緣分析的方法,它的原理是在一單管中同時擴增多個多態性DNA片段。STR位點是由不同數目重復單元組成的重復DNA序列。每一個STR位點均能被擴增且擴增產物標記上不同顏色的熒光,使得擴增產物很容易通過片段大小和顏色來區分。STR分型快速、經濟、易于自動化,能得到可重復的數據,且數據格式適合建立一個標準參考數據庫。由于快速、鑒定的細胞系結果明確,STR分型的應用價值最大。STR分型——潛力及局限3-5個堿基重復的DNA重復序列已常規性地用來做親緣鑒定、法醫鑒定、以及鑒定在20年之前的大災難中遇......閱讀全文
細胞系錯誤鑒定:終結的開始(三)
交叉污染檢測許多方法已被用來檢測交叉污染,包括同工酶分析、核型分析、人類白細胞抗原(HLA)分型,免疫分型和DNA指紋識別。這些方法都可以鑒別出某一種細胞系,但是分辨能力各不一樣。然而,這些方法在不同實驗室所得到的數據卻不盡相同,以致沒有任何一種方法可以用來建立一個標準參考數據庫。許多實驗室利用ST
細胞系錯誤鑒定:終結的開始
2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作組在Nature review cancer雜志上發表了題為《Cell line misidentification:the beginning of the end》前瞻性報道。以下是全文
細胞系錯誤鑒定:終結的開始(一)
2010年5月ATCC SDO(Standards Development Organization)工作組在Nature review cancer雜志上發表了題為《Cell line misidentification:the beginning of the end》前瞻性報道。以下是
細胞系錯誤鑒定:終結的開始(二)
案例和影響交叉污染和錯誤鑒定已有一段很長的歷史,這其中有許多的案例,我們很難去判斷哪一個是最重要及代價最高的。已被描述的經典案例是Hela細胞污染(關于Hela細胞污染有好幾個案例),令人驚奇的是,許多被Hela細胞污染的細胞系居然在一些備受尊敬的雜志上仍被使用,而這一使用距離它們最先發現為Hela
細胞系交叉污染或錯誤鑒定對研究是否有影響
細胞系交叉污染或錯誤鑒定對研究有影響。使用錯誤的細胞系或者是被污染的細胞系做研究,只會造成時間,金錢和精力的損失,以及造成實驗結果的不一致和不可重復。因此如果用被污染或錯誤的細胞系做研究,在發表文章或做進一步研究時極有可能需要用正確的細胞再重復實驗。
什么是細胞系鑒定?
所謂細胞系鑒定即通過STR(短串聯重復)圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一株細胞系的遺傳特征確立后,細胞系可以通過定期的檢測,以防止出現細胞系被誤認或交叉污染的情況。
細胞系鑒定的辦法和依據
細胞系鑒定目前主要基于國際身份認證委員會的標準。依據該標準,可以通過多重熒光PCR技術,對人源8個STR位點以及1個性別決定位點進行檢測。
ABO血型系統鑒定錯誤的原因分析
正確的血型鑒定是安全輸血的關鍵,ABO血型系統有兩個獨特性質,一是血清中常存在的反應性強的抗體,而紅細胞表面缺乏相應的抗原,二是許多組織細胞表面有規律的存在著ABH抗原,而分泌型的分泌液中也存在著ABH抗原,這兩種獨有的性質使ABO血型系統成為輸血和器官移植中最重要的血型系統,輸血前ABO血型鑒
什么時候需細胞系鑒定?
1)當建立或獲得一個新的細胞系時;?2)一個涉及到細胞試驗項目開始/結束時;?3)在細胞凍存之前,或細胞已連續培養2~3個月時;?4)發表文章或申請課題經費前;?5)細胞系表現不穩定或結果與預期差別較大時;?6)當實驗室使用超過一種細胞系時,所有細胞系應先鑒定以排除交叉污染的可能。
為什么要進行細胞系鑒定?
首先進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫藥的研究都采用培養細胞來進行,這些細胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細胞庫(如美國?ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得來。據估計,15-20%的實驗室,實驗中所使用的細胞已經不是原來的細胞系,或者與其它細胞系發
尚恩答疑-|-細胞系STR鑒定原理及結果解讀
1.? 匹配度大于多少時,可認為待測細胞系與標準細胞系具有相關性?匹配度大于80%(EV值大于0.8)時,可認為待測細胞系與標準細胞系具有相關性2.? 某個小鼠細胞鑒定匹配到另一個小鼠細胞,一定是錯誤細胞系嗎?不一定。首先去數據庫確認該細胞系有沒有公開的位點數據,如果有數據,且數據與檢測結果匹配不上
為什么STR鑒定對于ATCC細胞系來說很重要
ATCC 成立于 1925 年,是大的生物資源中心,由美國 14 家生化、醫學類行業協會組成的理事會負責管理,是一家全球性、非盈利生物標準品資源中心。 進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫藥的研究都采用培養細胞來進行,這些細胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細胞庫(如美國?ATCC,
AB0血型鑒定及交叉配血中常見錯誤
1.分型血清方面的原因(1)自制分型血清抗體:效價太低、親和力不強,造成定型不準確。(2)患者纖維蛋白原增高或為異常蛋白血癥:如多發性骨髓瘤,巨球蛋白血癥等,可產生緡錢狀假凝集。(3)患者輸入了高分子血漿代用品或靜脈注射造影劑等藥物:可引起紅細胞聚集,易誤認為凝集。(4)血清中可能存在的不規則抗體:
ABO血型鑒定及交叉配血中常見錯誤解析
交叉配血是確定能否輸血的重要依據,在血型鑒定的基礎上,通過交叉配血試驗進一步證實受血者和供血者之間不存在血型不合的抗原一抗體反應,以保證受血者的輸血安全。兩側均不凝集可輸血。若獻血人紅細胞與受血人血清(主側)發生凝集應禁止輸血;主側不凝集,次側(獻血人血清與受血者紅細胞)凝集,必要時可少量、慢速輸血
酵母菌的鑒定(三)
四、酵母菌生長曲線的測定試驗?1、將培養24小時左右的酵母斜面菌種,用無菌水洗下菌苔,以3000轉/分的速率離心,得菌體。將酵母菌體沉淀物再用無菌水洗2-3次后,制備酵母菌懸液(細胞數量約106左右/毫升),測數備用。?2、取上述菌懸液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培養液的試管中,下培養,以此為起始時間
陽離子的鑒定方法(三)
Cu2+1.取l滴Cu2+試液,加1滴6mol·L-1HAc酸化,加l滴K4[Fe(CN)6]溶液,紅棕色沉淀出現,示有Cu2+2Cu2+? +? [Fe(CN)6]4- = Cu2[Fe(CN)6]↓1.在中性或弱酸性溶液中進行。如試液為強酸性,則用3mol·L-1NaAc調至弱酸性后進行。沉淀不
食管癌細胞系中干細胞樣SP細胞的分離鑒定實驗
實驗材料 人食管癌細胞系試劑、試劑盒 胰酶RNA酶碘化丙啶四甲基偶氮唑鹽小牛血清DMEMDMSOK2HPO4Na2HPO4NaCI儀器、耗材 無菌分選管400目細胞篩水浴鍋離心機酶標儀電泳儀顯微鏡PCR儀實驗步驟 一、材料準備1. ?青霉素儲存液(1)將青霉素小瓶中的80萬單位的干粉充分溶解于8 m
《三體》中的科學哲學講座開始了
嘉賓:王一 香港科技大學副教授主辦: 墨子沙龍協辦: 中國科大新創校友基金會 中國科學技術大學教育基金會 上海市浦東新區科學技術協會 上海市浦東新區科技和經濟委員會 “一說《三體》——科學解讀三體世界觀”是繼《一說萬物》之后,墨子沙龍再次和王一老師合作,推出的線上系列科普直播活動
SEM燈絲壽命的終結
SEM燈絲壽命的終結?如何判斷燈絲壽命的盡頭?對于鎢燈絲,你根本看不到它的到來。這意味著燈絲可能在成像或分析過程斷裂,這會帶來很多不便。來自燈絲的碎片也可能污染真空柱的其他部件,這不僅需要換燈絲,還要清理、甚至更換其他部件,如韋氏帽。?當然,可以在使用壽命結束前更換燈絲,但它沒有得到充分利用,因此需
你的細胞有做過-STR-鑒定嗎?
據統計約 30% 細胞系被交叉污染或錯誤辨識,因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果……,這浪費大量時間、精力和金錢。Everything was going along fine until they discovered their HeLa c
質粒DNA的分離、純化和鑒定-(三)
操作步驟? 一、 細菌的培養和收集? 將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。? 二、 質粒DNA
進行細胞鑒定(Cell-Authentication)的根本原由-細胞錯誤識別被污染的危害及現狀
2009年Nature號召建立細胞STR數據庫、2010年IJC(Int J Cancer)期刊開始要求作者提供細胞鑒定報告、2011年ATCC的標準發展組織 (Standards Development Organization, SDO) 頒布了ASN-0002標準《Authentication
“GDP崇拜”能否終結?
今年是實施“十二五”規劃的第一年。中央關于“十二五”規劃的《建議》指出,“十二五”時期,是全面建設小康社會的關鍵時期,是深化改革開放、加快轉變經濟發展方式的攻堅時期。 筆者認為,實際上,“關鍵時期”與“攻堅時期”這二者之間存在著內在的邏輯關聯,從一定意義上說,全面建設小
這些電子工程師常犯的錯誤,你中招了嗎?(三)
為什么兩個電容并聯:一是:同種類型的電容并聯作用主要是擴容;二是:不同種類型的電容并聯一般是一個感性強、一個感性弱。小容量電容高頻信號易通過,大容量電容低頻信號易通過。大電容在低頻時能提供好的通路,而在高頻時由于其寄生電感的存在阻抗將變大而無法提供濾波通路,所以大電容不能濾高頻,而小電容在低頻時阻抗
復制錯誤的概念
中文名稱復制錯誤英文名稱replication error定 義DNA復制過程中核苷酸配對發生錯誤的現象。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),核酸與基因(二級學科)
Nature:死無對證的時代終結
日前,冷泉港實驗室(CSHL)研究團隊在Nature上發表關于大腦切片的研究報道,稱通過大腦切片可以準確地判斷大鼠生前所接受的行為訓練。這項研究為人們進一步理解大腦的學習和記憶編碼機制提供了新的角度。 感覺的決定是基于感覺皮層神經元的活動,但是生物體如何學習將這種活動轉化為合適的行為仍然有待摸
生命終結的暗示——回光返照
?? 回光返照現象主要發生于嚴重的器質性疾病的晚期病人,在瀕臨死亡時,機體調動尚未消耗殆盡的化學能量三磷酸腺苷會迅速變成二磷酸腺苷,突然釋放出大量能量,供給各器官組織,尤其是神經系統和內分泌系統應激的動力,使奄奄一息的病人突然出現假性好轉,如殘燈復明,一明即散。??? “回光返照”其實是對人臨死
如何根據-STR-數據判斷細胞系的身份?
收到細胞系鑒定結果以及 STR 信息,可以與參考數據庫進行比對。如果細胞樣本的每個 STR 位點和參考細胞 STR 位點都能重合匹配,即說明該細胞系正確,反之則說明你的細胞系可能被錯誤標記,交叉污染或發生遺傳不穩定。一般說來,匹配度≥80%即可認為該細胞系正確,匹配度<80%則說明該細胞系的來源需要
三豐粗糙度儀常見錯誤及解決方法
存儲卡 存儲卡錯誤一:當卡被寫保護時,執行存儲卡的寫,格式或刪除要求。 解決方法:從插槽中重新移走存儲卡,取消寫保護。 存儲卡錯誤二:存儲卡保存的數據超出存儲容量。 解決方法:插入一個新的存儲卡并格式化。實行新的保存操作。 存儲卡錯誤三:當讀取存儲卡時?發生轉存錯誤。 解決方法:確保
STR細胞鑒定意義
導讀:新買到的細胞,實驗室傳了幾代的細胞,又或者儲存于超低溫冰箱幾年不用的細胞,被污染了么? 鑒定正確么?用它做研究會影響實驗結果么? 沒有經過相應的細胞鑒定,使用了被污染的細胞,經過大量的實驗,寫出一篇論文,但是結論被推翻,論文被召回,大量的時間、物力和人力被浪費,一切都要從頭再來。背景介紹應