基因組文庫的擴增實驗
實驗方法原理 通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續幾輪的噬菌體生長中，對生長緩慢的重組噬菌體來說是十分不利的。實驗材料 λ 噬菌體文庫大腸桿菌鋪平扳細菌試劑、試劑盒 氯仿SM儀器、耗材 LB 或 NZCYM 瓊脂平板Sorvall SS-34 或相當型號加熱設備或水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液氯仿SM2. 培養基LB 或 NZCYM 瓊脂平板（150 mm)LB 或 NZCYM 頂層瓊脂糖3. 離心機和轉子Sorvall SS-34 或相當型號4. 專用設備預置于 47℃ 的加熱設備或水浴（用于頂層瓊脂糖）5. 載體和菌株λ 噬菌體文庫大腸桿菌鋪平扳細菌二、方法1. 為了擴增 λ 噬菌體文庫，將含 10000~20000 個重組噬......閱讀全文
基因組文庫的擴增實驗
通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續幾輪的噬菌體生長中，對生長緩慢的重組噬菌體來說是十分不利的。本實驗來源「分子克隆
基因組文庫的擴增實驗
實驗方法原理 通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續幾輪的噬菌體生長中，對生長緩慢的重組噬菌體來說是十分不利的
基因組文庫的擴增實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續
噬菌體文庫的擴增實驗
文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但在擴增時由于克隆的生長速率不同，文庫的組成可能會出現某種潛在的改變。這種文庫克隆組成比率的變化可以通過把文庫克隆預吸附到細菌上并使用一種高密度鋪平板和短期培養的方法而盡量減少。文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但
噬菌體文庫的擴增實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體 試劑、試劑盒
噬菌體文庫的擴增實驗
實驗材料?噬菌體試劑、試劑盒?MgSO4麥芽糖瓊脂糖氯仿DMSOSM儀器、耗材?離心機分光光度計水浴鍋實驗步驟 1.? 制備鋪平板菌（1）2.5 ml 新鮮過夜培養的宿主菌液接種于250 ml 含0.2%麥芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培養液中。（2）在37℃恒溫搖床劇烈搖蕩2~4 h，
粘粒和質粒文庫的擴增實驗
實驗材料 質粒試劑、試劑盒 LB甘油儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱實驗步驟 1. ?在含抗生素的平板上加一層硝酸纖維素膜，將抗藥性細菌鋪在硝酸纖維素膜上，培養細菌至菌落邊緣正好相接。2. ?往長滿菌落的平板中加入LB培養液，10 cm 平板約加2 ml，15 cm平扳約加4 ml。用一支滅菌的細胞刮
粘粒和質粒文庫的擴增實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 質粒 試劑、試劑盒
粘粒和質粒文庫的擴增實驗_基本方案
文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但在擴增時由于克隆的生長速率不同，文庫的組成可能會出現某種潛在的改變。這種文庫克隆組成比率的變化可以通過把文庫克隆預吸附到細菌上并使用一種高密度鋪平板和短期培養的方法而盡量減少。實驗材料質粒試劑、試劑盒LB甘油儀器、耗材硝酸纖維素膜培養箱實
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧
基因組DNA文庫用途十分廣泛，如用于人類及動植物基因組學研究，基因表達調控研究，分析、分離特定的基因片段等。通常情況下，基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA（gDNA） 毫無
黏粒文庫的擴增和貯存(在濾膜上擴增)
應用此種擴增方法，文庫不容易失真，這是由于在任何一步驟中，含有不同重組黏粒的混合菌群都不會在生長中發生競爭。但擴增過程冗長，而且有時由于主濾膜保存后菌落不再生長而丟失。本節還提供一種備選方法，即在 TB 平板上擴增。該備選擴增方案使那些生長不良的黏粒克隆易于丟失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」
黏粒文庫的擴增和貯存(在濾膜上擴增)
實驗方法原理 應用此種擴增方法，文庫不容易失真，這是由于在任何一步驟中，含有不同重組黏粒的混合菌群都不會在生長中發生競爭。但擴增過程冗長，而且有時由于主濾膜保 存后菌落不再生長而丟失。本節還提供一種備選方法，即在 TB 平板上擴增。該備選擴增方案使那些生長不良的黏粒克隆易于丟失。實驗材料 λ 噬
黏粒文庫的擴增和貯存(在濾膜上擴增)
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 應用此種擴增方法，文庫不容易失真，這是由于在任何一步驟中，含有不同重組黏粒的混合菌群都不會在生長中發生競爭。但擴增過程冗長，而且有時由于主濾膜保 存后菌落不再生長而丟失。本節還提供一種備選方法，即在 TB 平板上擴增。該備選
基因組文庫法
基因組文庫法一）基因組DNA分離、純化和加工[Mbo I酶檢測]1．準備1.5ml小試管4個；每管內含有：基因組DNA（在TE或水中）?????????????10.0μg10×Mbo I緩沖液?????????????????????????2.5μlH2O????????????????????
用－PCR－控制基因組－DNA－文庫的質量實驗
在該方案中，用限制性內切酶的混合物處理人類基因組 DNA(內切酶混合物的識別位點為 4bp)，產生大概 50?500bp 的片段。最終使用這一類型的表達文庫，是通過利用表型的和生化的篩選方法，分離編碼功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶處理后，基因組 DNA 片段成為平末端，然
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
一次雙向消減，需要總量為 2ug 的基因組 DNA 或 cDNA。大多數分離 RNA 和基因組DNA 的方法都適用于本實驗（Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸放射性化合物酚儀器、耗材 熱循環儀水浴箱瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑與設備實驗步驟 第1階段：RNA和DNA的分離一次雙向消減，需要總量為2ug的基因組DNA或cDNA。大多數分離RNA和基因組DNA的方法都適用于本實驗（Sambrooketal
用－PCR－控制基因組－DNA－文庫的質量實驗
試劑、試劑盒?ddH20Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶 dNTP質粒 DNAPCR 引物儀器、耗材?瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑和設備熱循環儀實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ddH202. 酶和酶緩沖液10X Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸dNTP，各
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 放射性化合物 酚 儀器、耗材
用－PCR－控制基因組－DNA－文庫的質量實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ddH20 Vent 緩沖液 Vent DNA 聚合酶 dNTP 質粒 DNA PCR 引物
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧2
技術支持資料：材料緩沖液和溶液- 堿裂解液I , 4°C50 mM 葡萄糖25 mM Tris-Cl (pH 8.0)10 mM EDTA (pH 8.0)配制堿裂解液I 約100ml，滅菌，保存在四度。- 堿裂解液II，新鮮配置，室溫保存0.2 N NaOH （從10N的NaOH新鮮制備）1% (
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧1
基因組DNA文庫用途十分廣泛，如用于人類及動植物基因組學研究，基因表達調控研究，分析、分離特定的基因片段等。通常情況下，基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA（gDNA） 毫無
基因組文庫和cDNA文庫的構建及篩選
劉芝華 中國醫學科學院腫瘤研究所??分子腫瘤學國家重點實驗室?概念：?基因組文庫是含有某種生物體全部基因的隨機片段的重組DNA克隆群體；cDNA文庫是指含有所有重組cDNA的克隆群體。???基因組文庫：來源于基因組DNA，反映基因組的全部信息，用于基因組物理圖譜的構建，基因組序列分析，基因在染色體上
RACE技術擴增構建全長cDNA文庫
實驗概要利用RACE(利用PCR技術快速擴增全長mRNA)技術構建全長cDNA文庫是傳統C庫構建技術的改進。本實驗即是利用寡核苷酸帽法，進行全長C庫的構建，從而掌握RACE技術的原理與基本操作方法。實驗原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子結構作為標簽，用通用引物識別并配對標簽序
黏粒文庫的擴增和貯存(在液體培養基內擴增)
不要過度擴增黏粒文庫，因為這樣會不可避免地引起原基因組的失真。生長較快的克隆會過度呈現，不穩定的克隆會發生重排，而生長慢的克隆可能會從文庫中完全消失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理不要過度擴增黏粒文庫，因為這樣會不可避免地引起原基因組的失真。生長較快的克隆會過度呈現，不
黏粒文庫的擴增和貯存(在液體培養基內擴增)
實驗方法原理 不要過度擴增黏粒文庫，因為這樣會不可避免地引起原基因組的失真。生長較快的克隆會過度呈現，不穩定的克隆會發生重排，而生長慢的克隆可能會從文庫中完全消失。實驗材料 λ 噬菌體包裝反應大腸桿菌接種菌株試劑、試劑盒 甘油儀器、耗材 卡那霉素的瓊脂平板TB 培養基Sorvall GSA 轉頭或同
黏粒文庫的擴增和貯存(在液體培養基內擴增)
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 不要過度擴增黏粒文庫，因為這樣會不可避免地引起原基因組的失真。生長較快的克隆會過度呈現，不穩定的克隆會發生重排，而生長慢的克隆可能會從文庫中完全消失。 實驗材料
基因組DNA文庫構建的基本流程
基因組 ?DNA文庫有十分廣泛的用途，如用于分析、分離特定的基因片段，用以基因表達調控、人類及動植物基因組工程的研究。通常情況下，基因組文庫構建的基本流程可以歸為4大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。 一、分離基因組DN
通過雜交篩選未擴增的黏粒文庫（濾膜影印）
經黏粒轉化的稠密細菌菌落可通過雜交的方法篩選，該方法源于質粒轉化菌落的大規模篩選（Hanahan and Meselon 1980)。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理經黏粒轉化的稠密細菌菌落可通過雜交的方法篩選，該方法源于質粒轉化菌落的大規模篩選（Hanahan and
利用血清篩選噬菌體文庫PCR擴增的模板
[器材和試劑] ●MicroAmp反應管（PerkinElmer） ●洗脫緩沖液（20mmol/LTris—ClpH8．5，2mmol/LEDTA，1％TritonX—100） ●GeneAmp9600PCR儀（PerkinElmer） ●正向引物：5’—AGAGATTA