親和層析實驗：常規方法（三）
6.仿生配基大部分的親和層析配基是天然存在的，其優點在于具有高度選擇性和強結合能力，但也存在某些缺點。這種配基穩定性低，需要進行純化，使用過程中批間差異大，易被其他生物分子污染，對滅菌方法敏感，并且成本高。為了克服這些局限性，加速親和層析在治療性蛋白質純化中的應用, 仿生型配基 (biomimetics)—合成親和配基或變構的親和配基已經成為研發重點，這是一種模仿天然生物配基結合方式和結構的物質。活性紡織染料適用性強，呈現出多種競爭性生物分子具有的表面極性和空間構向性特征，可在水溶液中作為很多蛋白質的競爭性抑制劑、輔酶或效應分子，是應用最廣泛的仿生配基之一 (MadoeryandMinchiotti,2006;Stellwagen，1”0)。包括應用最廣泛的 CibacronBlueF3 G 染料在內，大多數仿生配基都含三嗉支架（triazinescaffold), 將其修飾后可以提高特異性，這也是仿生染料-配基......閱讀全文
親和層析實驗：常規方法（三）
6.仿生配基大部分的親和層析配基是天然存在的，其優點在于具有高度選擇性和強結合能力，但也存在某些缺點。這種配基穩定性低，需要進行純化，使用過程中批間差異大，易被其他生物分子污染，對滅菌方法敏感，并且成本高。為了克服這些局限性，加速親和層析在治療性蛋白質純化中的應用, 仿生型配基 (biomime
親和層析實驗：常規方法
實驗步驟 一、親和介質的選擇 親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過
親和層析實驗：常規方法
實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。
親和層析實驗：常規方法（一）
一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。親和介質
親和層析實驗：常規方法（二）
二、配基的選擇選擇合適的配基，需要對配基和靶分子之間的天然相互作用有一定的認知及理解。靶分子與配基的相互作用必須是特異性結合，并且在不同的結合和洗脫條件下均應該穩定。此外，制訂親和純化的方案時，需著重考慮能否購買到商品化配基，還是需要從頭研制配基和介質。后者的成功在很大程度上取決于對蛋白質結構和相互
親和層析實驗：常規方法（四）
2.配基吸附對于多肽、蛋白質或核酸，通常采用的共價吸附是, 通過胺反應將配基上的氨基吸附在樹脂表面。溴化氰活化表面與伯胺發生反應形成亞胺碳酸鹽是最常見的胺反應吸附。最典型的伯胺是賴氨酸側鏈（Hermanson,1992;PorathetaU1%7)(詳見第 28 章）。這種活化形式的優點在于可以使用
常規動物實驗模型制作（復制）方法（三）
六、Alzhermer病的動物模型SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥鈉(35-40mg/kg體重)腹腔麻醉動物后，固定在腦立體定位儀上(參照大鼠全腦立體定位圖譜)，以前囟為零點，選出進刀坐標：前后坐標(AP)1.8mm，中線旁開(L)坐標1.0mm，腹側坐標(v)4.?0mm。首先用牙科鉆在上
親和層析實驗技術方法
INTRODUCTIONThis protocol describes a method for removing antibodies that react with bacterially encoded proteins by passing a crude preparation of im
親和層析實驗
可溶性抗原或膜結合抗原的分離 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
親和層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 TrisTSA裂解緩沖液脫氧膽酸鈉洗滌緩沖液三乙醇氨緩沖液儀器、耗材 層析柱離心管離心機實驗步驟 1. ?準備一支活化后被淬滅的Sepharose預柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫親和層析柱，并將它們串聯起來。2. ?以冰冷TSA溶液重懸50 g 細
實驗動物編號的常規方法
常用的標記法有染色、耳緣剪孔、烙印、號牌等方法。（一）顏料涂染這種標記方法在實驗室最常使用，也很方便。經常應用的涂染化學藥品有：①、涂染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液。 ②、涂染黃色：3～5%苦味酸溶液。 ③、黑色：煤焦油的酒精溶液。 ④、涂染咖啡色：2%硝酸銀溶液。標記時用毛筆或棉簽蘸取上述
實驗動物編號的常規方法
常用的標記法有染色、耳緣剪孔、烙印、號牌等方法。（一）顏料涂染這種標記方法在實驗室最常使用，也很方便。經常應用的涂染化學藥品有：①、涂染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液。 ②、涂染黃色：3～5%苦味酸溶液。 ③、黑色：煤焦油的酒精溶液。 ④、涂染咖啡色：2%硝酸銀溶液。標記時用毛筆或棉簽蘸取上述
免疫親和層析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 免疫親和介質 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 飽和 AMS 沉淀物 偶聯緩沖液
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒免疫親和介質溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見下文)溴
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒 免疫親和介質溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟 材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見
DNA片段的回收實驗——常規方法
實驗材料NA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?PAGE電泳，如EB染色的則在紫外燈下切下目的片斷，如齦染或其他非放染色的則在關下切下目的片斷。2. ?用少量脫緩沖液I將目的片斷膠條洗至一Eppendorf管中，用玻棒將凝膠搗碎，用1
檢驗三大常規之大便常規
?何時進行腦脊液檢查？? ? ?腰椎穿刺是常見的診療操作之一，對腦脊液進行檢查可用于明確腦膜炎、蛛網膜下腔出血或其他感染性疾病的診斷。腰椎穿刺操作本身還可用于減少腦脊液的量，從而減輕假性腦瘤和正常壓力腦積水患者的癥狀或后果。? ? 腦脊液各項指標都有什么意義？? ? 腦脊液壓力? ? 正常成人側臥位
常規化驗和三大常規化驗
常規化驗：? ? 常指較為簡單的化驗或常用化驗，是一類公認的常用化驗項目組合，比如血常規化驗、尿常規化驗、腦脊液常規等。常規化驗也可以是某些醫院或科室自行組合的一類化驗項目，比如“生化常規1組”、“生化常規2組”，“免疫化驗常規”等。常規化驗是在各級醫院實驗室中均能開展的較為普及、方便、實用
檢驗三大常規之大便常規
? 正常糞便由已消化和消化未盡的食物殘渣、消化道分泌物，大量細菌和水分組成，通過全腸道，特別是結腸直腸而逐漸形成，它不但能反映消化道的功能狀態及病理情況，也有助于某些全身疾病的診斷。三大常規之列中便有大便常規檢查。?? ?什么情況的患者需要做大便常規檢查：1．偶發或長期腹瀉的患者。2．較長時間便秘的
親和層析(affinity－chromatography)實驗方法：溴化氰活化
親和層析的實驗操作和一般柱層析類似，都包括：裝柱、上樣、洗脫、樣品收集、結果處理等步驟。溴化氰活化瓊脂糖用于配體固相化是實驗室親和層析最常用的技術之一，該方法簡便廉價，并廣泛應用于蛋白質、核酸、凝集素等。下面以此為例介紹親和層析的實驗方法：試劑與配制1.Sepharose 4B2.CNBr（劇毒）3
親和層析的操作實驗
試劑、試劑盒非特異性競爭 DNA液氮緩沖液 Z緩沖液 Ze柱再生緩沖液柱保存緩沖液儀器、耗材EconoCoIumn 柱實驗步驟材料與設備EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特異性競爭 DNA液氮試劑緩沖液 Z緩沖液 Ze柱再生緩沖液柱保存緩沖液(
親和層析的操作實驗
試劑、試劑盒 非特異性競爭 DNA液氮緩沖液 Z緩沖液 Ze 柱再生緩沖液 柱保存緩沖液儀器、耗材 EconoCoIumn 柱實驗步驟 材料與設備EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特異性競爭 DNA液氮試劑緩沖液 Z緩沖液 Ze柱再生緩沖液柱保
親和層析的操作實驗
親和層析的操作實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 非特異性競爭 DNA 液氮 緩沖液 Z
常規動物實驗模型制作（復制）方法（一）
一、腫瘤動物模型的建立將對數生長的腫瘤細胞收集?，?用無血清基質?10.0ml，?于?1500?轉/?分，?離心3min，?連續洗?3?次，?最后用無血清基質混勻，?用血球計數器計算腫瘤細胞數量(?平均?5?個中方格的細胞計數×104即是腫瘤數/?毫升)?。?計算完腫瘤細胞總數，?再將?腫瘤細胞密度
常規動物實驗模型制作（復制）方法（二）
四、呼吸系統疾病動物模型復制1、慢性支氣管肺炎模型??常選用大鼠、豚鼠或猴吸入刺激性氣體（如二氧化硫、氯、氨水、煙霧等）復制人類慢性氣管炎。現發現豬粘膜下腺體與人類相似，且經常發生氣管炎及肺炎，故認為是復制人類慢性氣管炎較合適的動物。用去甲腎上腺素可以引起與人類相似的氣管腺體肥大。2、肺氣腫模型??
金屬螯合親和層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 IPTGNiSO4蛋白酶抑制劑MCAC-EDTATriton儀器、耗材 層析柱轉子實驗步驟 1. ?接種含以pET載體表達帶組氨酸尾融合蛋白的大腸扦菌BL21（DE3）pLyaS菌株于10 ml M9ZB/氨芐青霉素/氯霉素培養基。于37℃搖蕩培養過夜。2. ?轉接1
金屬螯合親和層析實驗
天然MCAC純化帶組氨酸尾的可溶性融合蛋白 變性條件下用MCAC純化帶組氨酸尾的不溶性融合蛋白 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
胰島素親和層析實驗
試劑、試劑盒部分純化的胰島素受體NaCl胰島素瓊脂糖溶液 F溶液 G溶液 H儀器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 濃縮器銀染試劑盒實驗步驟材料與設備部分純化的胰島素受體，得自 WGA-瓊脂糖柱層析（見本單元實驗 3)NaCl(5mol/L)胰島素瓊脂糖（~2 ml 預裝膠）（SigmaC
胰島素親和層析實驗
胰島素親和層析實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 部分純化的胰島素受體 NaCl 胰島素瓊脂糖
實驗室安全常規燃燒的撲救方法
1. 在可燃液體燃著時,應立即拿開著火區域內的一切可燃物質,關閉通風器,防止擴大燃燒。若著火面積較小,可用抹布、濕布、鐵片或沙土覆蓋,隔絕空氣使之熄滅。但覆蓋時要輕,避免碰壞或打翻盛有易燃溶劑的玻璃器皿,導致更多的溶劑流出而再著火。2.酒精及其他可溶于水的液體著火時,不可用水滅火,可采用抗溶性泡沫、