酵母菌DNA制備
實驗材料 酵母試劑、試劑盒 YPD破菌緩沖液酚氯仿異戊醇LB儀器、耗材 玻璃珠試管搖床培養箱離心機實驗步驟 1. 注盛于一個13 mm×100 mm 無菌玻璃試管中的2 ml 培養基接種含有帶目的基因的質粒的酵母單菌落，在轉動或搖動培養箱中30℃過夜培養到靜止期。2. 將1.5 ml 的過夜培養物轉移到微量離心管中，室溫高速離心5 s，倒掉上清，快速振蕩分散沉淀物。 3. 細胞用200 μl 破菌緩沖液重懸，加0.3 g 玻璃珠（約200 μl 體積）及200 μl 酚/氯仿/異戊醇，在漩渦混合器上高速振蕩2 min，室溫高速離心5 min。4. 取1~2 μl 水相轉化感受態大腸桿菌只HB101或MH1，涂布在帶有合適的抗生素的LB平板上以質粒上的抗藥性標志進行選擇。......閱讀全文
質粒DNA的大量制備實驗
堿裂解法 氯化銫/溴化乙錠平衡離心法 層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制
DNA－芯片的制備與應用
DNA 芯片的制備與應用DNA 芯片的出現，是生物技術領域的一次革命，雖然現在無法預知它帶給我們的變化。但由于它在人類基因組計劃，基因表達和藥物篩選等方面的潛在用途。目前已有越來越多的公司和研究機構加入到DNA芯片的設計與開發。DNA芯片技術集成了集成電路制造，照相平板印刷，DNA合成，探針的熒光標
鮭精擔體DNA制備實驗
利用這一方案可獲得剪切好的高質量鮭精擔體DNA，它可用于轉化實驗和其他需要高質量擔體DNA的實驗中。實驗材料鮭精DNA試劑、試劑盒TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材離心機搖床超聲儀實驗步驟1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后
制備DNA測序模板實驗
制備單鏈M13噬菌體DNA 小量裂解物中制備λ噬菌體DNA 雙脫氧測序的雙鏈質粒DNA的堿變性 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
DNA－親和介質的制備實驗
DNA 親和介質的制備實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
質粒DNA的小量制備實驗
堿裂解小量制備法 煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
質粒DNA的大量制備實驗
實驗方法原理 大量堿裂解方法不僅相當快捷可靠，而且可獲得相當純凈的粗制DNA。煮沸法的大量制備也簡單易行，但得到的DNA比較粗制。高純度的質粒DNA可通過氯化銫/溴化乙錠平衡離心法或層析法進一步純化粗制DNA得到。實驗材料 培養基菌株試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇乙酸鉀異丙醇儀器、耗材 離心管實驗
鮭精擔體DNA制備實驗
實驗材料 鮭精DNA試劑、試劑盒 TE酚氯仿乙酸鈉儀器、耗材 離心機搖床超聲儀實驗步驟 1. ?將TE緩沖液加入裝有干燥鮭精DNA的燒杯中，至鮭精DNA濃度為5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反復吹打后，用攪拌棒于4℃攪拌過夜，最終獲得一種均勻粘稠液體。?2. ?將一個較大的超聲波探頭插入燒杯
DNA－親和介質的制備實驗
試劑、試劑盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸銨乙醇酚 氯仿氯仿 異戊醇NaOAcT4 DNA連接酶酚異丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸鉀KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶緩沖液TE接頭-激酶緩沖液乙醇胺-
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 培養基試劑、試劑盒 EDTASDS乙醇VTE儀器、耗材 平板實驗步驟 1. ?接種一個單菌落于5 ml無菌LB培養液中，在37°C培養至飽和狀態（過夜）。2. ?取1.5 ml培養液以最大轉速離心20 S。棄上清。3. ?沉淀用10
制備DNA測序模板實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 LBTEM13聚乙二醇容易讓頂層瓊脂乙酸鈉乙醇儀器、耗材 巴斯德吸管試管離心機實驗步驟 1. ?如果起始用M13復制型DNA或M13單鏈DNA，以0.5 ng 重組M13mp復制型DNA或5~10 ng 單鏈DNA轉化40 μl ?感受態大腸桿菌DH5αF'株
質粒DNA的小量制備實驗
實驗方法原理 當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。堿裂解法是最常用的小量制備質粒DNA的方法。實驗材料 細菌克隆試劑、試劑盒 LB培養基抗生素葡
質粒DNA的小量制備實驗——
實驗采用國產的質粒小量抽提試劑盒。它是一種新型的離子交換柱，在特定的條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間，結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。實驗材料DNA試劑、試劑盒LB培養基卵清溶菌酶異丙醇TE儀器、耗材離心機漩渦混合器水浴鍋實驗步驟一、實驗步驟1. ?接種一
細菌質粒－DNA－的小量制備
實驗方法原理 由于大腸桿菌染色體 DNA 比通常用作載體的質粒 DNA 分子大得多，因此在提取過程中，染色體 DNA 易斷裂成線型 DNA 分子，而大多數質粒 DNA 則是共價閉環型，根據這一差異便可以設計出各種分離、提純質粒 DNA 的方法。堿裂解法就是基于線型的大分子染色體 DNA 與小
DNA測序電泳的樣品制備
當在預電泳時，即可進行樣品的制備，將反應完畢的樣品在沸水浴中加熱1～3分鐘，立即置于冰上即可。如果樣品長時間不用，則應重新處理。可使用4～6%聚丙烯酰胺凝膠，膠厚0.4 mm。厚度小于0.4 mm的膠可能導致信號太弱。加樣時不必吸去上層覆蓋的礦物油，但要小心地吸取礦物油下的藍色樣品。
質粒DNA的制備和純化
實驗概要質粒（plasmid）是一種染色體外的穩定遺傳因子，大小從1~200kb不等，為雙鏈、閉環的DNA分子，并以超螺旋狀態存在于宿主細胞中。質粒主要發現于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復制和轉錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數，并表達所攜帶的遺傳信息。質粒在細胞內的復制一般有兩種類型：
DNA熒光染色的樣品制備
試劑、試劑盒 PBS儀器、耗材 DNA熒光染料 流式細胞儀實驗步驟 DNA是細胞內含量比較恒定的參量，隨著細胞增殖周期的各時相而發生變化。熒光染料（如PI）可選擇性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的雙螺旋堿基之間，與細胞特異性結合，DNA含量與熒光染料的結合量成正比，因此通過測定熒光強度可獲知細胞的
人外周血白細胞DNA制備
實驗概要本實驗從人外周血中制備了白細胞DNA，介紹了制備基本原理及操作步驟。實驗原理從全血制備白細胞DNA，可用非離子去污劑Triton ? X-100直接破裂血中紅細胞和白細胞的細胞膜，釋出血紅蛋白及細胞核，在反應體系中含一定濃度蔗糖，維護核膜內外的滲透壓，以防止核膜破裂，通過離心等手段即可獲得白
斑馬魚胚胎DNA的制備
材料和試劑1.????????蛋白酶K（羅氏03115836001）2.??????? 1M的Tris，pH值8.33.??????? 氯化鉀4.??????? 吐溫20（10％，EMD4 biosciences，655207）5.??????? NP40（10％，Merck，492018）設備1.
動物組織中DNA的制備
（一）原 理DNA是所有生物體的基本組成物質。真核生物DNA主要存在于細胞核中。制備DNA時應將細胞核膜打破方能釋放出來。細胞中的DNA和RNA分別與蛋白質相結合，形成脫氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在細胞破碎后，這兩種核蛋白將混雜在一起。因此，要制備DNA首先要將這兩種核蛋白分開。已知這兩種核蛋白在不
FFPE樣本核酸（DNA/RNA）制備
福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片的存檔代表了珍貴且來源廣泛的生物醫學研究材料。隨著越來越多的研究人員轉向 FFPE 樣品的分子分析，開發特定的操作步驟，考慮這些樣品的獨特性質就變得越來越重要。QIAGEN 在 FFPE 樣本純化及下游檢測整個流程中都提供完善的解決方案。QIAamp
小量制備質粒DNA(強堿法)
實驗概要本文介紹了強堿法小量制備質粒DNA的原理及操作流程。有助于了解基因工程操作中運載基因的載體，掌握最常用的提取質粒DNA的方法。實驗原理堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA的變性與復性的差異而達到分離的目的。利用溶菌酶、強堿(NaOH)及表面活性劑(SDS)使細胞破壁、膜，釋放出胞內染色體D
制備互補DNA的方法過程
制備互補DNA，往往需要先分離從目的基因轉錄來的mRNA.如果該基因編碼的蛋白質是細胞中的主要蛋白質，則此基因的產物是總mRNA的主要組成部分???。就胰島B細胞而論，此細胞含有高水平胰島素前體mRNA，后者有時可以沉淀正在翻譯的mRNA的核糖核蛋白體，如果用特異抗體結合所表達的蛋白質(抗原)，則可
質粒DNA的小量制備實驗——煮沸小量制備法
實驗方法原理當菌體在NaOH和?SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性而呈絮狀，離心時可沉淀下來。推薦采用本方案從1-24個菌落培養液中制備少量的質粒DNA，盡管該方案十分快捷，但制備的DNA的
SDS堿裂解法制備質粒DNA——小量制備
用堿和 SDS 處理可以從細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒則可以用電泳或限制性核酸內切酶消化的方法鑒定；經聚乙二醇處理進一步純化后，其可以用做 DNA 測序反應的模板。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理用堿和 SDS 處理可以從小量 ( 1~2 ml）細菌培養物中
SDS堿裂解法制備質粒DNA——中量制備
實驗方法原理用堿和 SDS 處理可以從中度規模（20~50 ml）的細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的 DNA 產物可用于電泳分析或限制性內切核酸酶消化，經柱層析進一步純化之后，還可用于轉染哺乳動物細胞。試劑、試劑盒堿裂解液抗生素乙酵酚氯仿STETE儀器、耗材LB、YT 或 Terrific 培
細菌中制備基因組DNA實驗——小量制備
真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細胞核內，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。實驗方法原理提取DNA的一般過程是將分散好的組織細胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液
SDS堿裂解法制備質粒DNA——大量制備
實驗方法原理用堿和 SDS 處理可以從大規模（500 ml）的細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒則可通過柱層析或 CsCl-溴化乙錠梯度離心進一步純化。試劑、試劑盒堿裂解液抗生素乙酵酚氯仿STETE儀器、耗材LB、YT 或 Terrific 培養液實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液(1) 堿
酵母菌基因組DNA的提取實驗——基本方案
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒SE緩沖液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K緩沖液Tris儀器、耗材高速冷凍離心機臺式離心機恒溫水浴低溫冰箱冷凍真空干燥器取液器電泳儀水平電泳槽紫外觀測儀實驗步驟1. ?1.5 ml ?對數生長期細菌細胞。2. ?離心，12 000 rpm，1-2 min。3. ?沉淀。4
酵母菌四分體的制備與剖分實驗
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒酵母裂解酶山梨糖儀器、耗材解剖顯微鏡解剖針實驗步驟1a. ?Glusulase酶處理：用無菌水洗滌孢子3次，再用5 ml 無菌水重懸并取30 μl 稀釋在270 μl 無菌水中。在光學顯徽鏡下觀察細胞，檢測完整的子囊，加3 μl 稀釋的Glusulase酶到孢子制備液中，用