為什么引物中GC含量越高，需要設定更高的退火溫度？
GC堿基互補配對時形成三個氫鍵，非特異性配對后需要較高的溫度才能打開氫鍵，從而促進特異性配對。......閱讀全文
為什么引物中GC含量越高，需要設定更高的退火溫度？
GC堿基互補配對時形成三個氫鍵，非特異性配對后需要較高的溫度才能打開氫鍵，從而促進特異性配對。
根據引物合成單如何設定PCR退火溫度？
問題：引物單上數據如下上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%)Tm(1M Na+)：68.2Tm(50mM Na+)：46.6下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%)Tm(1M Na+)：66.2Tm(50mM Na+)：44.6順便問下大家，Tm(1M
根據引物合成單如何設定PCR退火溫度？
PCR退火溫度應如何設置？ 問題：引物單上數據如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%) Tm(1M Na+)：68.2 Tm(50mM Na+)：46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%) Tm(1M Na+)：
引物退火溫度
一般低4、5度就好了。如果你用軟件設計的引物，比如oligo6什么的，它會在tm之外給你一個operate t，就是操作溫度，用這個就好了。
引物的熔解溫度與退火溫度
primer的一個重要參數是熔解溫度(Tm)。這是當50%的primer和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度.Tm對于設定PCR退火溫度 是必需的。在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證primer同目的序列有效退火， 同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般
PCR的退火溫度怎么設定
PCR中退火的那步是引物與模板結合，一般來說，退火溫度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根據你設計引物的軟件比如primer5.0或Olige 6 推薦的溫度。但這些都不是絕對的。你要是在他的推薦溫度下沒有目的條帶，你可以試試做一個溫度梯度，摸索一下退火溫度。
退火溫度與引物的TM值有什么聯系
退火溫度與引物的TM值的關系主要和DNA聚合酶與其buffer有關。有些退火溫度要比TM低5度、3度，有些還會高3度，有些是一模一樣的。主要參考不同公司所生產的DNA聚合酶的說明書。
shrna引物退火原理
1. 載體取2-5ug，在25ul體系中，用2.5ul的酶切30min-1h，回收載體：載體:---2ul（2-5ug）酶---------2.5ulBuf--------2.5ul水---------18ul回收的時候希望濃度高點。2. Oligo退火形成雙鏈若為2OD=5.4nmol的話，則每個
PCR儀常見問題及回答
1. cDNA產量的很低可能的原因：＊RNA模板質量低＊對mRNA濃度估計過高＊反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足＊同位素磷32過期＊反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺＊zui常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系＊
PCR儀常見問題及回答
PCR儀常見問題及回答1. cDNA產量的很低可能的原因：＊RNA模板質量低＊對mRNA濃度估計過高＊反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足＊同位素磷32過期＊反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺＊zui常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是R
PCR實驗操作常見問題及解決方法
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反
PCR儀常見問題及回答
1. cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反
RNA提取與RTPCR(3)
2.3 RT-PCR的引物設計 RT-PCR引物設計和一般PCR引物設計可以遵循同樣的原則。細心地進行引物設計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。設計理想的引物都有以下共同的特點，而設計失敗的引物則各有各的缺
PCR儀常見問題及回答，值得一看！
一、遇到的問題 1. cDNA產量的很低 可能的原因： RNA模板質量低 對mRNA濃度估計過高 反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足 同位素磷32過期 反應體積過大，不應超過50μL 2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺 最常見的原因在于您的反應體系是PCR的
增加PCR特異性
引物設計 ?細心地進行引物設計是PCR中zui重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的令人滿意的特點：??1.典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨特性，并降低序
增加PCR特異性
增加PCR特異性（一）引物設計細心地進行引物設計是PCR中最重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的令人滿意的特點：1.典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨特性
PCR經驗總結（一）
(首先聲明，此文不如分子克隆第三版權威與分子克隆相背處，請信分子克隆)增加PCR的特異性1. primers design ?? 這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些條件a? 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同
閑聊PCR
各位先生，各位女士，各位來賓，各位領導，各位海外僑胞，港澳同胞，歡迎參加兩位新人的結婚晚會哦 啊 拿錯了， 這是我明天參加婚禮的發言這個才是各位戰友 我們來聊聊PCR ：）PCR可以說是目前分子生物學實驗中應用最為廣泛的一種技術。從最初的在幾個水浴鍋里把試管放來放去，到現在各種先進的PCR儀， 到R
PCR實驗技巧1
增加PCR的特異性：?1. prime理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60%?c. 5'端和中間序列要多GC,以增
pcr退火溫度是根據什么原則設計？
在模板變性后溫度快速冷卻至40℃～60℃(某個退火溫度?)的時候，可使引物和模板發生結合。由于模板DNA?比引物復雜得多，引物和模板之間的碰撞結合機會遠遠高于模板互補鏈之間的碰撞，這就使PCR后期的過程成為可能。退火溫度與時間，取決于引物的長度、堿基組成及其濃度，還有靶基序列的長度。對于20個核苷酸
閑聊PCR
雖然長了些, 但耐心看完,應該對你的問題有所幫助各位戰友 我們來聊聊PCR?：）PCR可以說是目前分子生物學實驗中應用最為廣泛的一種技術。從最初的在幾個水浴鍋里把試管放來放去，到現在各種先進的PCR儀， 到REAL TIME PCR。 設備是越來越先進，方法是越來越多，但基本的原理還是那套。然而實際
第一章：掌握這－8－點令－PCR－引物設計事半功倍
臨門一腳，先講核心，掌握核心，引物設計任你馳騁。引物長度引物長度對反應特異性、解鏈溫度、退火時間都有較大的影響，最終影響到 PCR 反應 是否成功。多數情況下，引物長度約 18~30bp, 引物太短會導致非特異擴增，太長雖然會增加特異性，但是二級結構（如發夾結構）出現的概率增大。引物的解鏈溫度PCR
掌握這－8－點令－PCR－引物設計事半功倍
引物長度 引物長度對反應特異性、解鏈溫度、退火時間都有較大的影響，最終影響到 PCR 反應 是否成功。多數情況下，引物長度約 18~30bp, 引物太短會導致非特異擴增，太長雖然會增加特異性，但是二級結構（如發夾結構）出現的概率增大。引物的解鏈溫度 PCR 反應的特異性很大程度上依賴于引物的解鏈
pcr實用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&
整理的PCR資料.供大家分享.
PCR實驗技巧增加PCR的特異性：1. prime理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60%c. 5'端和中間序列要多
PCR實驗操作常見問題及解決方法（二）
二、Generacer如何針對Generacer試劑盒設計基因特異性引物（GSP）？使用5’或3’RACE試劑都需要至少一條基因特異性引物，您在設計引物時需要注意以下幾點要求：*50-70％的GC含量，以提高引物熔點（Tm）*23-28個堿基長度，以提高引物特異性*降低3’端GC含量，將引物非特異性
PCR儀常見問題及解答
? 聚合酶鏈式反應是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行
PCR實用大全3
PCR經驗總結（先聲明，此文不如分子克隆第三版權威與分子克隆相背處，請信分子克隆)一、增加PCR的特異性1、primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些條件1）足夠長，18-24bp,以保證特異性。當然不是說越長越好，太長的引
PCR實驗技術指南之PCR反應參數
1. 變性：在*輪循環前，在94℃下變性5-10min 非常重要，它可使模板DNA 完全解鏈，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不完全，往往使PCR 失敗，因為未變性完全的DNA 雙鏈會很快復性
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1. 變性：在*輪循環前，在94℃下變性5-10min 非常重要，它可使模板DNA 完全解鏈，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不完全，往往使PCR 失敗，因為未變性完全的DNA 雙鏈會很快復性