篩選質粒載體構建表達文庫實驗
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材空氣培養箱平頭鑷子裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維素濾膜塑料盒和玻璃陪氏大平皿Whatman3 MM 濾紙質粒表達文庫實驗步驟材料緩沖液及溶液貯存液，緩沖液及試劑的組分請見附錄 1。將貯存液稀釋至合適濃度。封閉緩沖液：10 mmol/L Tris-Cl（pH8.0)150 mmol/LNaCl0.05%(V/V)Tween-2020%(V/V) 胎牛血淸其他備選封閉液如 5%(m/V......閱讀全文
YAC實驗——YAC文庫構建
YAC帶有天然染色體所有的功能元件，包括一個著絲粒，一個DNA復制起點，兩個端粒。YAC能夠容納長達幾百kb的外源DNA，這是質粒和黏粒辦不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更大的步移距離，同時能夠減少完整基因組文庫所需的克隆數目。實驗步驟1. ?盡管當插入片段大于10
YAC實驗——YAC文庫篩選
實驗步驟1. ?YAC中心實驗室用于篩選文庫的方法進展很快。2. ?將一塊或多塊微量滴定板微孔中的YAC克隆轉印到尼龍膜上，用單拷貝探針進行雜交，就可以篩選YAC文庫了。3. ?然而，由 于雜交實驗的信噪比較低以及制備所有的轉印尼龍膜所需的花費巨大，絕大多數實驗室已采用PCR方法來篩選文庫。4. ?
噬菌體文庫的擴增實驗
文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但在擴增時由于克隆的生長速率不同，文庫的組成可能會出現某種潛在的改變。這種文庫克隆組成比率的變化可以通過把文庫克隆預吸附到細菌上并使用一種高密度鋪平板和短期培養的方法而盡量減少。文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增，它可以大大增加文庫的拷貝數，但
噬菌體文庫的擴增實驗
實驗材料?噬菌體試劑、試劑盒?MgSO4麥芽糖瓊脂糖氯仿DMSOSM儀器、耗材?離心機分光光度計水浴鍋實驗步驟 1.? 制備鋪平板菌（1）2.5 ml 新鮮過夜培養的宿主菌液接種于250 ml 含0.2%麥芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培養液中。（2）在37℃恒溫搖床劇烈搖蕩2~4 h，
噬菌體文庫的擴增實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體 試劑、試劑盒
基因組文庫的擴增實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾
差減－cDNA－文庫的建立實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 ［＋］ 和 ［-］cDNA 文庫（ATCC 或 Stra
差減－cDNA－文庫的建立實驗
實驗方法原理 實驗材料 ［＋］ 和 ［-］cDNA 文庫（ATCC 或 Stratagene）試劑、試劑盒 TE 緩沖液EcoRI EDTA蔗糖溶液瓊脂糖凝膠TBE 緩沖液乙醇S1 核酸酶S1 核酸酶緩沖液苯酚 氯仿 異丙醇乙酸鈉AluIRsaI去離子甲醜胺SDS酵母 tRNA氯仿 異丙醇磷
建立隨機重疊DNA插入文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙酸銨 ATP 乙醇 甘油 蒸餾水 IPTG MgCl2 NaCl 酚
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗
實驗方法原理 SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的存在，可以形成發夾、假結、凸環、G-四聚體等多種空間結 構，它
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的
差減－cDNA－文庫的建立實驗
差減文庫包含了存在于一種細胞或組織而不存在于另一種細胞或組織的 mRNA cDNA 克隆。這個 cDNA 文庫被用來分離相應于一類 mRNA 的一組 cDNA 克隆，或用 于分離一個特定mRNA 的 cDNA 克隆。這中間篩選 cDNA 克隆的過程是很費勞力的。來源：《精編分子生物學實驗指南（第五版
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
實驗方法原理 Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶
建立隨機重疊DNA插入文庫實驗
下面的方案描述了鳥槍法測序的起始步驟，從靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌體載體構建 DNA 片段文庫，也包括斷裂靶 DNA 的兩種方法--超聲法和噴霧法，以及用 DNA 聚合酶修復片段末端的技術要點。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。試劑、
基因組文庫的擴增實驗
實驗方法原理 通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續幾輪的噬菌體生長中，對生長緩慢的重組噬菌體來說是十分不利的
Northwestern篩選蛋白表達文庫實驗
Northwestern 篩選蛋白表達文庫的方法是通過構建 IPTG 可誘導的融合蛋白表達文庫（融合蛋白的 N 端由載體序列編碼，C 端由克隆到載體的 cDNA 文庫編碼），進而誘導融合蛋白表達，并將蛋白質固定于硝酸纖維素濾膜上，以標記的 RNA 探針進行篩選，最終獲取能與靶 RNA 分子特異性結合
基因組文庫的擴增實驗
通過平板培養可對重組噬菌體文庫進行擴增，平板培養的原種可直接來源于本方案所述的包裝混合物。但只要可能，該擴增過程可被省略，而感興趣的 DNA 序列可從原始文庫直接篩選。擴增將不可避免地降低文庫的復雜性，部分原因在于在連續幾輪的噬菌體生長中，對生長緩慢的重組噬菌體來說是十分不利的。本實驗來源「分子克隆
隨機RNA文庫的SELEX篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SELEX 技術是一種利用隨機寡核苷酸（DNA 或 RNA）文庫篩選靶分子的特異性配基的組合化學技術。最常用的是隨機 RNA 文庫，因為 RNA 分子中除 G-C、A-U 堿基對以外，還有 G-U 等變偶堿基對的存在，可以形
粘粒和質粒文庫的擴增實驗
實驗材料 質粒試劑、試劑盒 LB甘油儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱實驗步驟 1. ?在含抗生素的平板上加一層硝酸纖維素膜，將抗藥性細菌鋪在硝酸纖維素膜上，培養細菌至菌落邊緣正好相接。2. ?往長滿菌落的平板中加入LB培養液，10 cm 平板約加2 ml，15 cm平扳約加4 ml。用一支滅菌的細胞刮
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 封閉緩沖液 氯仿 裂解緩沖液 檢測抗原-抗體復合物所用試劑 SM TNT 緩沖液 洗滌緩沖液
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料3
粘粒和質粒文庫的擴增實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 質粒 試劑、試劑盒
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
試劑、試劑盒 封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩沖液 125I 標記的蛋白質 A 或 125I 標記的免疫球蛋白放射性碘化第二抗體第一抗體LB 或 SOB 瓊脂平板儀器、耗材 空氣培養箱平頭鑷子 裝有防水黑墨水（印度墨水）并帶有 18 號針頭的注射器硝酸纖維
篩選質粒載體構建表達文庫實驗
檢測結合抗體的方法有以下 3 種：放射化學篩選，生色反應篩選及化學發光反應篩選。3 種方法的優缺點在本章導言中有所論述。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒封閉緩沖液氯仿裂解緩沖液檢測抗原-抗體復合物所用試劑SMTNT 緩沖液洗滌緩
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料 3' 引物鏈親和素磁珠儀器、耗材 電泳儀PCR 儀離心機凝膠成像儀
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
可利用合成雙鏈寡核苷酸篩選構建于λ噬菌體的 cDNA 表達文庫，以鑒定與特異 DNA 結合蛋白質相對應的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒ATP結合緩沖液變性溶
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
試劑、試劑盒 ATP結合緩沖液變性溶液二硫蘇糖醇EDTA乙醇激酶 連接酶緩沖液酚氯仿篩選緩沖液SDS醋酸鈉TET4 噬菌體 DNA 連接酶T4 噬菌體多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非變性聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 烤盤結晶皿平頭鑷子裝有防水黑墨水注射器硝酸纖維素濾膜Sephadex G
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
實驗材料 噬菌體試劑、試劑盒 瓊脂糖LBNaOHSSCTris·Cl儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱實驗步驟 1. ?通過系列等比稀釋滴定噬菌體文庫的滴度。?2. ?重組噬菌體與鋪平板的宿主菌混合于培養試管中（表一），于37 ℃溫育20 min。?表一、噬菌體文庫鋪平板組分最佳配制方法?3. ?按每個