從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
實驗方法原理 實驗材料 轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒 PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1. 2 mol L KCl透析緩沖液液氮儀器、耗材 貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Dounce 氏玻璃勻漿器（B 型研杵）Beckman JA-20 離心轉子或相當的轉子磁性攪拌器或傾斜臺 Beckman JA-20 離心轉子或相當的轉子磁性攪拌器或傾斜臺、 管型透析膜（14000 MWCO）、電導計實驗步驟 1a) 收集轉瓶培養的細胞：將 5× 108?10× 108 細胞置 1 L 的塑料瓶 1850 g 離心 20 min。輕輕倒去上清并丟棄，將細胞轉入50 mL 錐形刻度離心管中（每管 2?3 L 培養液中的細胞）。進行步驟 2。1b) 收集單層培養的細胞：單層細胞長滿后去掉培養液。用足量 PBS 洗 1 ......閱讀全文
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物—核提取物制備
實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1. 2 mol L KCl透析緩沖液液氮儀器、耗材貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Dounce 氏玻璃勻漿器（B
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
實驗方法原理 實驗材料 轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒 PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1. 2 mol L KCl透析緩沖液液氮儀器、耗材 貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Doun
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
核提取物的制備核提取物制備優化細胞質（S-100)組分的制備實驗方法原理實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒PBS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
從哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物
核提取物的制備 核提取物制備優化 細胞質（S-100)組分的制備 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
哺乳動物細胞中制備核和細胞質提取物—細胞質組分制備
實驗材料細胞質提取物試劑、試劑盒10× 細胞質提取緩沖液儀器、耗材Beckman 50型固定角轉子或相當的轉子實驗步驟1) 仔細測量細胞質提取物的體積（見基本方案步驟 7 中的上清）。加入 0.11 倍體積的10×細胞質提取緩沖液，充分混合。2)100 000 g 離心 1 h。3)將上清（± 10
哺乳動物細胞制備核和細胞質提取物—核提取物制備優化
實驗材料轉瓶或單層培養的哺乳動物細胞（如HeLa細胞）試劑、試劑盒高鹽緩沖液分別含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl儀器、耗材貝克曼 JS4. 2 轉子或相當的轉子50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管）Dounce 氏玻璃勻
從哺乳動物細胞或組織分離DNA
1. 根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌 2 次，用刮棒把細胞刮入約 0.5 ml 的 TBS 中，將細胞懸液轉移到冰浴的離心管中，用 1 mlTBS 沖洗培養皿，并入離心管中的細胞懸液。于 4℃ 以
核提取物的制備實驗
實驗材料?哺乳動物試劑、試劑盒?PBS低滲緩沖液低鹽緩沖液透析緩沖液儀器、耗材?轉子離心機電導計透析膜勻漿機離心管實驗步驟 1a.? 收集轉瓶培養的細胞：將濃度為5~10×108細胞/l 的培養液用1 L 的塑料瓶1 850 g 離心20 min，將細胞收入50 ml 錐形離心管中（每管收2~3 L
核提取物的制備實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素：無機鹽的種類、濃度、溫度和PH值。
細胞核連綴分析實驗_從組織中制備細胞核
實驗材料動物組織試劑、試劑盒PBS蔗糖儀器、耗材電動勻漿器特氟隆研杵實驗步驟一、用超速離心法從組織中分離細胞核1. 切下動物組織，放入置于冰上的平皿中，用冰冷的 PBS 沖洗。2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液，用剪刀或剃須刀片將組織切碎，轉入一個干凈試管中，加蔗糖Ⅰ溶液至終體積為每克組織 10 ml。3. 用
哺乳動物精核的制備實驗
實驗材料哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟1. 培養并收獲 3L 1×106?細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 20 倍于沉淀體積（40
哺乳動物精核的制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材 帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟 1. 培養并收獲 3L 1×106 細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 2
核提取物的制備實驗（一）
從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。實驗方法原理通過向某些蛋白質溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析，是物理變化，可復原。對于特定的蛋白質，影響蛋白質鹽析的主要因素
核提取物的制備實驗（二）
從培養細胞中分離的細胞核制備成的提取物在體外轉錄和mRNA加工中具有精確的功能，（1）純化蛋白質（2）核提取物。實驗材料細胞核試劑、試劑盒KCl高鹽緩沖液儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?按基本方案中歩驟1~7操作。?2. ?將細胞核懸液分成5等份。在冷室內不斷攪拌，按如下方法在每份懸液中加入1
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇的液體緩沖液。
純化DNA實驗_從哺乳動物細胞或組織分離DNA
基因純化，可以用于（1）對大量提取的質粒DNA進行純化；（2）常用的方法有柱層析法和氯化銫梯度離心法。實驗材料細胞試劑、試劑盒TBS抽提緩沖液儀器、耗材離心管實驗步驟1. 根據樣品類型，從下列方法中選一個作為步驟 1 進行操作。(1) 細胞樣品① 單層培養的細胞以用冰預冷的 TBS 將單層細胞洗滌
從培養的哺乳動物細胞中分離高爾基體
實驗材料細胞試劑、試劑盒粗勻漿液儀器、耗材塑料離心管實驗步驟1. 向 6 ml 的粗勻漿液中（細胞收獲后以大約 5X105?/ml 懸于 0.25 mol/L 蔗糖，10 mmol/L pH 7.4 的 Tris-HCl 中），加入 6 ml 含有 10? mmol/L pH 7.4 Tris-HC
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境 1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于
實用哺乳動物細胞培養手冊（中）
細胞培養環境1、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受 其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響， 要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌 操作區設在室內較少走動的內側，常規
脈沖場凝膠電泳制備DNA（哺乳動物細胞和組織DNA的分離）
本方案敘述了從培養細胞和組織制備 DNA 樣品的方法。病人或動物來源的白細胞也能用作 PFGE 的高分子質量 DNA 樣品。如果確有必要，DNA 也可以從哺乳動物細胞分離出的胞核制備。經驗表明：從胞核制備 DNA 沒有優點，因為從完整細胞制備的 DNA 同樣易于酶切。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三
脈沖場凝膠電泳制備DNA（哺乳動物細胞和組織DNA的分離）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案敘述了從培養細胞和組織制備 DNA 樣品的方法。病人或動物來源的白細胞也能用作 PFGE 的高分子質量 DNA 樣品。如果確有必要，DNA 也可以從哺乳動物細胞分離出的胞核制備。經驗表明：從胞核制備 DNA 沒有優點，
脈沖場凝膠電泳制備DNA（哺乳動物細胞和組織DNA的分離）
實驗方法原理 本方案敘述了從培養細胞和組織制備 DNA 樣品的方法。病人或動物來源的白細胞也能用作 PFGE 的高分子質量 DNA 樣品。如果確有必要，DNA 也可以從哺乳動物細胞分離出的胞核制備。經驗表明：從胞核制備 DNA 沒有優點，因為從完整細胞制備的 DNA 同樣易于酶切。實驗材料
核纖層和富含核纖層組分的制備實驗——哺乳動物組織細胞
實驗材料組織試劑、試劑盒溶液 H儀器、耗材尼龍網勻漿器實驗步驟組織制備1. 切碎組織，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗組織/組織培養物：溶液 H：15 mmol/L PIPES，pH 7.280 mmol/L KCl15 mmol/L NaCI0.5 mmol/L 精咪0.2 mmo
哺乳動物細胞的簡介和生物特征
哺乳動物細胞（mammalian cell)來自哺乳動物體的細胞。它的培養由于可用來大量生產疫苗、重組蛋白和其他醫療產品而倍受重視。已建成許多重要的細胞系，這些細胞來自鼠、人、猴等。 哺乳動物是全身被毛,運動快速,恒溫,胎生和哺乳的脊椎動物.它是脊椎動物中軀體結構,功能和行為最復雜的一個高等動
從培養細胞中制備細胞核基質/中間纖維骨架結構
實驗材料細胞試劑、試劑盒Tritron X-100抽提緩沖液儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟1. 在 4℃ 用 PBS 洗細胞一次。2. 在 4℃ 用含 0.5% Tritron X-100 的細胞骨架緩沖液抽提細胞 3 到 5 分鐘。直到消化步驟，每 107?個細胞最少要用 1 ml 緩沖液，以后減半
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
試劑、試劑盒?甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS) 緩沖液 G緩沖液 H 緩沖液 DTM 緩沖液+0.1 ml L KCl實驗步驟 材料HeLa 細胞（培養和保存條件見下文。我們也成功地使用過 CellexBiosciences 公司制備并冷凍的 HeLa 細胞
HeLa－細胞核提取物的制備實驗
在本實驗中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法從HeLa細胞制備核提取物的。這一基本方法大概是制備體外轉錄和DNA結合實驗用因子的最常用的方法。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒甘油液氮MgCl2?6 H2O硫酸銨HeLa 細胞磷酸緩沖鹽溶液（PBS)緩沖液