支原體的檢測實驗_低漲處理地衣紅染色觀察法
實驗方法原理本法為固定染色法，簡便易行，標本可長期保存，不僅適于檢測支原體，亦可用于檢測真菌和細菌。實驗材料細胞試劑、試劑盒培養液枸櫞酸Carnoy地衣紅冰醋酸酒精儀器、耗材離心機實驗步驟1. 取材用支持物蓋片培養法或培養液均可；用培養液時，先吸取培養液1 毫升，500～800 轉/分，離心5 分鐘后去上清，余0.2 ml備用。2. 低漲處理用新鮮配制的0.5 %的枸櫞酸溶液，處理蓋片細胞或加入到1項0.2 ml中（懸液）置10 分鐘。3. 固定用新配制的Carnoy液固定兩次，共10 分鐘，取出蓋片涼干；如為培養液，則應先離心棄上清固定液，余沉淀物0.2 ml，制成涂片2～3 張。4. 染色用2 %醋酸地依紅染5 分鐘染液配法：地衣紅 2 g，冰醋酸 60 ml，加蒸餾水至100 ml，支原體和細胞被染成紫紅色，如染色過深可用 75 ％酒精脫色。5. 封片純酒精過三次......閱讀全文
支原體的檢測實驗_低漲處理地衣紅染色觀察法
實驗方法原理本法為固定染色法，簡便易行，標本可長期保存，不僅適于檢測支原體，亦可用于檢測真菌和細菌。實驗材料細胞試劑、試劑盒培養液枸櫞酸Carnoy地衣紅冰醋酸酒精儀器、耗材離心機實驗步驟1. ?取材用支持物蓋片培養法或培養液均可；用培養液時，先吸取培養液1 毫升，500～800 轉/分，離心5 分
支原體的檢測實驗
相差顯微鏡檢測法 低漲處理地衣紅染色觀察法 熒光染色法 電鏡檢測法 培養檢測法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
支原體的檢測實驗_熒光染色法
實驗方法原理熒光顯微鏡檢查法，熒光染料用 Hoechst 33258，它是一種能與DNA 特異結合的熒光染料。支原體內含有DNA，能著色，是現有檢測法中最方便和最有效的一種。實驗材料細胞試劑、試劑盒Hanks醋酸甲醇蒸餾水儀器、耗材蓋片顯微鏡實驗步驟1. ?標本蓋片培養細胞匯合前從瓶中取出（如細胞已
培養細胞的染色實驗——吖啶橙染色熒光觀察法
實驗方法原理吖啶橙（Acridine Oringe：AO）是一種常用熒光染料，用于直接染色觀察活細胞或固定染色觀察細胞均可。吖啶橙對DNA和RNA都能染色，快速、簡便和有一定的特異性。吖啶橙對活細胞毒性小，配成2×10－4～1×10－4?可用于直接染色觀察法更好。實驗材料細胞試劑、試劑盒酒精PBSC
支原體污染及檢測
（1）支原體污染在細胞培養中最常見、不易被查覺，但支原體污染可顯著影響細胞功能干擾實驗結果。支原體是介于細菌和病毒之間的目前所知能獨立生活的最小微生物，它無細胞壁，形態呈高度多形性，最小直徑0.2um，可通過濾器。?目前通過對國內100余株/系細胞的檢測，形勢不容樂觀。污染率達30%?~?60%?。
果蠅唾腺染色體制片實驗_觀察法
實驗方法原理果蠅唾腺染色體是處于體細胞同源染色體的配對狀態，由于多次復制而不分開，因而形成具有1 000-4 000根染色體絲的巨大染色體,又稱為多線染色體.，本實驗利用剖離果蠅三齡幼蟲的唾腺,，壓制染色體玻片標本的方法，觀察多線染色體的特征。實驗材料果蠅試劑、試劑盒水醋酸洋紅儀器、耗材解剖針雙筒解
染色體組型分析實驗_觀察法
實驗方法原理染色體組型分析是對染色體組中處于有絲分裂中期時染色體的數目、大小、形態、著絲點的位置以及次縊痕、隨體的有無等形態特征作一描述。將一個細胞內的染色體按照一定的順序排列起來所構成的圖像就稱為該細胞的核型。?染色體的排列原則：①染色體的大小（即長度），②著絲粒的位置，③特殊標記。實驗材料小鼠儀
蠶豆根尖微核檢測實驗——觀察法
實驗方法原理來自污染環境中的各種理化因子對機體會產生不同的影響。有的會引起染色體的損傷，如微核，染色體橋，染色體斷片，染色體環等。本實驗利用環境污水及藥物處理蠶豆根尖細胞，可觀察到上述現象。?實驗材料蠶豆試劑、試劑盒水儀器、耗材顯微鏡載玻片蓋玻片實驗步驟1. ?蠶豆發芽處理，藥物或污染源處理。?2.
支原體的檢測實驗_電鏡檢測法
實驗方法原理在用一般方法難以確定時，可做電鏡檢測。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶儀器、耗材吸管實驗步驟1. ?細胞培養 48～72 小時。2. ?接近匯合前，用0.05%～0.25%胰蛋白酶消化細胞5～10 分鐘。3. ?用吸管輕輕吹打，制備成細胞懸液。
支原體的檢測實驗_培養檢測法
實驗方法原理這是用支原體培養基方法進行檢測，培養法稍顯繁鎖，但比較精確。實驗材料肉湯血清試劑、試劑盒細胞懸液儀器、耗材培養基實驗步驟1. ?肉湯制備用支原體肉湯（Sigma 產）和北京生物制品所制兩種均可；用前加10%馬血清；2. ?培養每45 ml肉湯培養基加2.5×106?/ml細胞懸液5 ml
血清質量的鑒定有哪些方面？
●理化性質：如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（應小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質量越高。血紅蛋白也是越低越好。 ●微生
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答2
6、血清的有關問題：新生牛血清：新出生牛5天內取血制成小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答2
6、血清的有關問題：新生牛血清：新出生牛5天內取血制成小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋
植物細胞有絲分裂觀察——染色觀察法
實驗材料蠶豆側根試劑、試劑盒結晶紫 醋酸洋紅 醋酸地衣紅 改良石炭酸品紅 鹽酸儀器、耗材鑷子 載玻片 吸水紙 顯微鏡 蓋玻片 酒精燈刀片中期 （metaphase）從染色體排列到赤道面上，到它們的染色單體開始分向兩極之前，這段時間稱為中期。有時把前中期也包括在中期之內。中期染色體在赤道面形成所謂赤道
有關細胞支原體污染的討論和防止經驗分享
支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長，營養要求比細菌高。細胞培養（特別是傳代
六種染色后光鏡觀察法檢測肝癌細胞凋亡
作者：楊連君，司曉輝，王文亮，王文勇，趙一嶺，方正清［摘? 要］ 目的：探討簡便易行的在光鏡下通過形態學觀察檢測細胞凋亡的方法，并對其進行比較。方法：首先用6%的乙醇作用6 h誘導人肝細胞癌細胞系HCC9204細胞凋亡，然后進行未固定細胞的臺盼藍染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)雙染色，細胞固定后
支原體染色檢測試劑盒使用說明
產品簡介：支原體染色檢測試劑盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一種經典的利用DNA熒光染色法檢測支原體污染的試劑盒，其原理是當細胞發生凋亡時，染色質會固縮，Hoechst33258染色后在熒光顯微鏡下觀察，正常細胞的細胞核呈正常的藍色，而凋亡細胞的細胞核會呈致密濃染，或
動物細胞/組織培養常見的一些問題（二）
13.離心動物細胞的離心速率：?? 回收動物細胞，離心速率一般為300g，5 - 10 分鐘，離心強度過大將造成細胞破裂死亡。?14.細胞生長緩慢：1）換用了不同的培養基或血清，解決方法是可比較不同培養基成分，用生長實驗比較以前批次和新批次的血清， 提高接種細胞數，使細胞逐步適應新的培養基 。2）
細胞支原體污染的熒光檢測方法：DNA螢光染色法
DNA螢光染色法 ·原理︰利用螢光染劑（bisbenzimide, Hoechst 33258）偵測支原體污染。此染劑會結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區域，因為支原體之DNA中A-T含量占多數（55～80%），所以可將其染色而偵測。被支原體污染
支原體的檢測
實驗材料 細胞儀器、耗材 培養瓶載物片蓋片顯微鏡實驗步驟 1. ?標本制備用尖鑷子從培養瓶中直接取出預先置入的支持物（長形蓋片；24 小時前置入），令細胞面向上，置放在載物片上，再覆以24 mmX 36 mm的較大蓋片；如不用支持物培養法，也可取少許培養液滴在載物片上，再覆以蓋片法觀察亦可。2. ?
支原體的檢測實驗_相差顯微鏡檢測法
實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶載物片蓋片顯微鏡實驗步驟1. ?標本制備用尖鑷子從培養瓶中直接取出預先置入的支持物（長形蓋片；24 小時前置入），令細胞面向上，置放在載物片上，再覆以24 mmX 36 mm的較大蓋片；如不用支持物培養法，也可取少許培養液滴在載物片上，再覆以蓋片法觀察亦可。2. ?觀察相
病原微生物染色實驗——乙型肝炎表面抗原
實驗方法原理乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是由多肽組成的脂蛋白，由于抗原內含有豐富的二硫鍵成分，經過氧化劑而轉變為磺酸，然后再與染色液產生較強的親和力進行著色。通過地衣紅（Orcein）染色法，能夠較好地顯示乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒二甲苯無水乙醇中性樹膠蒸餾水
細胞培養大攻略8
79、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？?不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0 ， 溫度 37℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定
關于細胞培養無菌環境的介紹
無毒和無菌是體外培養細胞的首要條件。細胞在活體內，解毒系統和免疫系統可抵抗微生物或其他有害物質的入侵，但細胞在體外培養的過程中，缺乏機體免疫系統的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質的解毒能力。為保證細胞能在體外環境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區域、良好的個人衛生、無菌試劑和培養基以及無菌
支原體培養實驗
實驗材料?肺炎支原體試劑、試劑盒?糖酵解培養基基礎培養基牛血清酵母浸液酚紅醋酸鉈 青霉素儀器、耗材?培養皿燒杯玻璃棒天平移液管離心機棉花拭子實驗步驟 一、標本采集?支原體常侵及人和動物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取樣后放入2~3 ml支原體液體培養基的小管中，或取其分泌液，若標本是組織塊，可在滅
熒光檢測支原體
實驗方法原理在無抗生素情況下，至少將細胞培養一周，將培養上清轉移至處于對數生長早期的指示細胞中，孵育 3~5d ，將細胞固定和染色，尋找細胞核之外的熒光。實驗材料來自于7天單層培養的無抗生素的細胞培養上清液或經離心后的上清液指示細胞試劑、試劑盒Hoechst 33258 染料BSS-PRD-PBSA
熒光檢測支原體
實驗方法原理在無抗生素情況下，至少將細胞培養一周，將培養上清轉移至處于對數生長早期的指示細胞中，孵育 3~5d ，將細胞固定和染色，尋找細胞核之外的熒光。實驗材料來自于7天單層培養的無抗生素的細胞培養上清液或經離心后的上清液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
去壁低滲法制備植物染色體標本實驗
實驗材料黑麥(Secalecereale)、大麥(Hordeumvulgare)種子或洋蔥(Alliumcepa)鱗莖試劑、試劑盒對二氯苯飽和溶液甲醇冰醋酸70%酒精纖維素酶果膠酶Giemsa原液磷酸緩沖液(pH6.8～7.2)KCl儀器、耗材恒溫培養箱顯微鏡載玻片酒精燈實驗步驟1.取材:先將種子浸
去壁低滲法制備植物染色體標本實驗
?一、實驗目的： ? 1、掌屋植物染色體標本的去壁低滲方法 ? 2、了解中期染色體的形態結構 ? 二、實驗原理： ? 植物細胞有很堅實的細胞壁，染色體很難像動物染色體那樣平整地貼在載玻片上，可通過纖維素酶和果膠酶處理去掉細胞壁；用低滲溶液處理可以提高染色體的分散程度。陳瑞陽等（1979，19
果蠅的形態、生活周期及其飼養實驗_觀察法
實驗方法原理雄蠅體型較小，末端鈍而圓，顏色深，腹背面有4個腹片，第一對足的跗節前端有性梳,而雌蠅體型較大，末端尖，顏色淺，腹背面的有5條黑色條紋。腹面有6個腹片，無性梳。實驗材料大幼蟲試劑、試劑盒乙醚培養基儀器、耗材麻醉瓶培養瓶高壓鍋實驗步驟一、材料和方法?1. ?生活史觀察：卵、幼蟲、蛹、成蟲。果