T7RNA聚合酶／啟動子表達實驗
實驗材料 載體試劑、試劑盒 氨芐青霉素卡那霉素pGP裂解緩沖液儀器、耗材 培養箱分光光度計離心機實驗步驟 1. 將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化一種標準大腸桿菌菌株，此菌株不應帶有可指導T7 RNA聚合酶合成的質粒。轉化物涂布于氨芐青霉素平皿，于37℃溫育培養過夜。 2. 挑取獨立的轉化菌落于LB/氨芐青霉素培養基中，37℃培養，通過小量制備方法獲得質粒DNA。以限制性酶譜分析確證基因正確插入與否。 3. 從pGP1-2轉化大腸桿菌K38株涂布LB/卡那霉素平皿上，30℃下培養過夜（24 h）。挑取單個的轉化菌落于LB/卡那霉素培養基中，30℃培養。4. 將一含有Pt7控制下的待表達基因的載體轉化入大腸桿菌K38/pGP1-2，于LB/卡那霉素培養基上生長（轉化期間細胞可經熱激處理），將轉化物涂布于LB/氨芐青霉......閱讀全文
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗
基本方案 備選方案 備選方案2 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 載體 試劑、
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗
實驗材料 載體試劑、試劑盒 氨芐青霉素卡那霉素pGP裂解緩沖液儀器、耗材 培養箱分光光度計離心機實驗步驟 1. ?將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化一種標準大腸桿菌菌株，此菌株不應帶有可指導T7 RNA聚合酶合成的質粒。轉化物涂布于氨芐青霉素平皿，于37℃溫育培養
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗2
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒氨基酸混合物M9培養基甲硫氨酸甲醇儀器、耗材熒光顯微鏡離心機分光光度計實驗步驟1. ?將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化一種標準大腸桿菌菌株，此菌株不應帶有可指導T7 RNA聚合酶合成的質粒。轉化物涂布于氨芐青霉素平皿，于37℃溫育培養過
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗3
實驗材料噬菌體試劑、試劑盒PEGIPTG儀器、耗材培養箱離心機實驗步驟1. ?制備從M13噬菌體mGP1-2原種，加PEG溶液沉淀濃縮噬菌體。重懸噬菌體于M9培養基，滴定其滴度。?2. ?將由“基本方案”步驟1所得的含T7 啟動子表達質粒轉化M13許可性大腸桿菌細胞，轉化物涂布于氨芐青霉素平皿上，3
T7－RNA聚合酶/啟動子表達實驗1
在適宜的條件下，T7 RNA聚合酶/啟動子系統表達的基因產物可占細胞總蛋白的25%以上，但多數情況下產量比這個比例要低得多。實驗材料載體試劑、試劑盒氨芐青霉素卡那霉素pGP裂解緩沖液儀器、耗材培養箱分光光度計離心機實驗步驟1. ?將含有待表達基因的片段亞克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，轉化
RNA干涉實驗——采用RNA聚合酶Ⅲ啟動子表達siRNA分子
實驗方法原理因為哺乳動物細胞不具備低等真核生物細胞所具有的擴增 RNAi 信號的機制，因此人工合成或體外轉錄的 siRNA 分子在細胞內的作用是瞬時性的，不適合用于進行靶基因的表達受到抑制后細胞表型的長期變化觀察，也不適于進行文庫的篩選。此外，體外制備 siRNA 分子的成本比較高，而且 siRNA
啟動子—基因表達的發動機
眾所周知，一段基因從轉錄開始，最終形成蛋白質執行功能，離不開一個高效、匹配的啟動子。啟動子的一般結構包括核心啟動子元件和上游調控元件。核心啟動子元件又包括轉錄起始點和TATA框，主要作為RNA聚合酶結合并起始轉錄的位點，上游調控元件能夠通過與對應的反式作用因子相結合改變轉錄的效率，如圖1。
啟動子—基因表達的發動機
眾所周知，一段基因從轉錄開始，最終形成蛋白質執行功能，離不開一個高效、匹配的啟動子。啟動子的一般結構包括核心啟動子元件和上游調控元件。核心啟動子元件又包括轉錄起始點和TATA框，主要作為RNA聚合酶結合并起始轉錄的位點，上游調控元件能夠通過與對應的反式作用因子相結合改變轉錄的效率，如圖1。?????
啟動子與轉錄因子/基因表達調控蛋白
目的基因的表達調控生命活動豐富多彩、千變萬化。但是萬變不離其宗，不管如何變化都圍繞著中心法則展開。核酸作為遺傳物質指導蛋白質的表達，表達產生的一些特殊蛋白（如轉錄因子、調控蛋白）反過來又對DNA指導合成蛋白質的過程進行調控。對基因表達調控的研究一直是生物學研究熱點，涉及到生命活動的各個過程，也是各類
用λ噬菌體－PL－啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
實驗材料 載體和細菌菌株PL 表達載體陽性對照質粒試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液L-色氨酸SDS 凝膠加樣緩沖液SDS-聚丙烯酰胺凝膠靶基因或 cDNA 片段LB 瓊脂平板LB 培養基M9 基本培養基儀器、耗材 SorvallGSA 轉頭或相當的轉頭沸水浴振蕩培養器實驗步驟 材料緩沖液和
用λ噬菌體－PL－啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 載體和細菌菌株 PL 表達載體 陽性對照質粒 試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液
用λ噬菌體－PL－啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
λ噬菌體 PL?啟動子是受控于溫度敏感阻抑物（cIts857) 的強效啟動子，阻抑物可在低溫下阻抑 PL?啟動子的轉錄，但在髙溫下不能。因此帶有λ噬菌體啟動子的載體必須以帶有 cIts857 基因的菌株作為宿主。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞
用堿性磷酸酶啟動子和信號序列分泌表達外源蛋白實驗
實驗材料 大腸桿菌菌株pTA1529 或 pBAce陽性對照質粒試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液微量營養MOPS 鹽中性磷酸鹽緩沖液SDS 凝膠加樣緩沖液SDS-聚丙烯酰胺凝膠靶基因或 cDNA 片段誘導培養基 LB 瓊脂平板LB 培養基儀器、耗材 Sorvall GSA 轉頭或相當的轉頭
用－IPTG－誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因實驗
實驗材料 帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株IPTG 誘導的表達載體試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液IPTGSDS 凝膠加樣緩沖液SDS-聚丙烯酰胺凝膠靶基因或 cDNA 片段LB 瓊脂平板LB 培養基儀器、耗材 SorvallGSA 轉頭或相當的轉頭沸水
用堿性磷酸酶啟動子和信號序列分泌表達外源蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌菌株 pTA1529 或 pBAce 陽性對照質粒 試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色
用－IPTG－誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因實驗
本方案將在疑難解析和誘導啟動子表達蛋白的優化部分討論影響質粒表達效率的因素。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株IPTG 誘導的表達載體試劑、試劑盒考馬斯亮藍染色溶液或
用堿性磷酸酶啟動子和信號序列分泌表達外源蛋白實驗
本實驗介紹關于用堿性磷酸酶啟動子（phoA) 和信號序列在大腸桿菌中分泌表達外源蛋白的過程。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料大腸桿菌菌株pTA1529 或 pBAce陽性對照質粒試劑、試劑盒考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液微量營養MOP
用－IPTG－誘導啟動子在大腸桿菌中表達克隆化基因實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株 IPTG 誘導的表達載體 試劑、試劑盒
關于原核表達載體的原件啟動子的介紹
啟動子是DNA鏈上一段能與RNA聚合酶結合并起始RNA合成的序列，它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子，基因就不能轉錄。由于細菌RNA聚合酶不能識別真核基因的啟動子，因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。 原核啟動子是由兩段彼此分開且又高度保守的核苷酸序列組成，對mRNA的合成
用－T7－噬菌體啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3) pET 載體或同類載體 陽性對照質粒 試劑、試劑盒
用－T7－噬菌體啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
實驗材料 大腸桿菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3)pET 載體或同類載體陽性對照質粒試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液IPTGSDS 凝膠加樣緩沖液SDS-聚丙烯酰胺凝膠靶基因或 cDNA 片段NZCYM 瓊脂平板NZCYM 培養基儀器、耗材 SorvallGSA 轉頭或
用－T7－噬菌體啟動子在大腸桿菌中表達克隆基因實驗
Tabor 和 Richardson 在 1985 年及 Studier 和 Moffatt 在 1986 年提出了一個新的利用 T7 噬菌體啟動子的表達系統，使用的是從 T7 噬菌體基因組獲得的轉錄信號。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實
表達蛋白檢測實驗
實驗方法原理 當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料 生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒
表達蛋白檢測實驗
免疫印跡法 免疫沉淀法 點印跡法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是
iRNA干擾GFP表達實驗
實驗概要本文介紹了iRNA干擾GFP表達實驗的原理及方法步驟。實驗原理RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特
iRNA干擾GFP表達實驗
【原理】RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特定基因的大約21堿基長短的雙鏈siRNAs(smallinte
原核表達載體的重要調控元件（啟動子、SD序列與終止子）
1．啟動子 啟動子是DNA鏈上一段能與RNA聚合酶結合并起始RNA合成的序列，它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子，基因就不能轉錄。由于細菌RNA聚合酶不能識別真核基因的啟動子，因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。 原核啟動子是由兩段彼此分開且又高度保守的核苷酸序列組成，
基因表達的系列分析實驗
SAGE(Velculescuetal.1995) 是基于 PCR 技術的一種高靈敏度研究基因表達的方法，可得到 mRNA 文庫的定性及定量信息。自 1995 年此技術產生以來，發表了大量的相關文章，表明 SAGE 可同時檢測大量基因的表達水平的變化。實驗材料玻璃及塑料器皿試劑、試劑盒溶液與緩沖液引
基因表達系列分析實驗（SAGE）
實驗材料感興趣的細胞或組織試劑、試劑盒糖原EDTA緩沖液SDSBSATween 20連接子T4 DNA 連接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸鈉乙醇DMSOPCR引物乙酸銨DNA ladder聚丙烯酰胺 TBE凝膠DNA參照pZErO-1 質粒TE緩沖SOC培養液Tris · Cl儀器、耗材微量離心
基因表達的系列分析實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 玻璃及塑料器皿 試劑、試劑盒 溶液與緩沖液 引物