蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。 注意事項： 1. 一向聚焦與二向電泳之間需要平衡，時間視蛋白質的性質而定，一般為10min，最多不超過15min。 2. 過量的上樣量會引起雙向圖形畸形，特別在一向聚焦時，當樣品濃度超過5mg時，則蛋白質凝聚和沉淀，使二向時產生水平和垂直條紋。 3. 含尿素的試劑均應避免過高的溫度處理，一般不要超過30℃，否則尿素分解產生異硫氰酸鹽會引起羧基甲酰化而導致電荷不均一性。 4. 第一向中過量的去污劑會嚴重影響雙向電泳圖譜，因此聚焦完畢進行平衡前，用雙蒸餾水沖洗膠條，以除去殘留的去污劑。 5. 雙向電泳中雙向凝膠間的界面緊密接觸非......閱讀全文
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。 注意事項： 1
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。 注意事項： 1
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。注意事項：1. 一向聚焦與二向電泳之
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。注意事項：1. 一向聚焦與二
蛋白質的雙向電泳實驗
實驗方法原理 蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離; 第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后, 可以得到蛋白質分子的等電點
蛋白質的雙向電泳實驗
等電聚焦法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離;
蛋白質技術——雙向電泳
實驗概要蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. ?雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1000個E.coli蛋白，并表明蛋白質譜不是穩定的，而是隨環境而變化. ?雙向電泳原理簡明，第一向進行等電聚焦，蛋白質沿pH梯度分離，至各自的等電點；隨后，再沿垂直的方向進行分子
蛋白質的雙向電泳實驗方法
第一向（等電點聚焦，IEF）1）凝膠條的準備1．以帽凝膠端（2個校準環：4mm和10mm）朝下，將4根玻璃管插入兩個凝膠灌注裝置的每個托架中，這樣玻璃管恰好站在兩個分隔室之一的“充填船”上。從玻璃管頂端到玻璃管底端拉入PP線（小心，線不易移動），否則以后將不能用它們將膠溶液拉上來。2．溶解分離膠溶液
蛋白質雙向電泳過程與體會
蛋白質雙向電泳過程與體會?雙向電泳IEF (sigma) IEF（not IPG）/SDS-PAGE最簡單的裝備推薦如下，適合于沒多少money做IPG又想做“熱”的所謂蛋白質組的，嘻嘻！?IEF用Biorad的圓盤電泳槽（不行用國產的吧，不推薦），SDS-PAGE用六一廠的就可以了（ft，六一廠應
蛋白質雙向電泳過程與體會
??? 雙向電泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最簡單的裝備推薦如下,適合于沒多少money做IPG又想做“熱”的所謂蛋白質組的.? ? IEF用Biorad的圓盤電泳槽（不行用國產的吧,不推薦）,SDS-PAGE用六一廠的就可以了（ft,六一廠應該給我money吧,
蛋白質的雙向電泳實驗_等電聚焦法
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離; 第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后, 可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。本實驗目的是
雙向電泳
實驗概要本實驗介紹了雙向電泳技術，先進行等電聚焦電泳（按照pI分離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），經染色得到二維分布的蛋白質圖。實驗原理雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上
雙向電泳
蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1 000個E.coli蛋白，并表明蛋白質譜不是穩定的，而是隨環境而變化. 雙向電泳原理簡明，第一向進行等電聚焦，蛋白質沿pH梯度分離，至各自的等電點；隨后，再沿垂直的方向進行分子量
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗
試劑、試劑盒尿素裂解溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? IPG 干膠條水化液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗
試劑、試劑盒尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材等電聚焦儀IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG ( IPG
雙向電泳操作步驟——雙向電泳操作步驟
實驗方法原理雙向電泳（two-dimensional electrophoresis）是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合，即先進行等電聚焦電泳（按照pI分離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒ddH2O溴酚藍指示劑
雙向電泳操作步驟——組織來源的蛋白質樣品的溶解和制備
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SDS尿素儀器、耗材離心管轉子實驗步驟1. ?稱重后將樣品加入Dounch勻漿器。每100 mg 組織加入1.5~2.0 ml SDS/或尿素/溶解緩沖液，用B號研棒沖擊50次，然后以A號研棒沖擊50次。2. ?放置幾分鐘后，取一小份樣品于200 ul 離心管100 000
蛋白質雙向電泳(twodimensional－electrophoresis)過程與體會3
二、一向電泳（13cm的holder）（1）取大約70-100ng的蛋白與溶脹液混合總體積達到250vl（2）將上述溶液加到holder 的兩個電極之間。（3）去掉膠條的保護膜，膠面朝下，先將膠條尖端朝膠條槽的尖端方向放入膠條槽中，慢慢下壓膠條，并前后移動，避免生成氣泡，最后放下膠條平端，使溶液浸濕
蛋白質雙向電泳(twodimensional－electrophoresis)過程與體會1
雙向電泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最簡單的裝備推薦如下，適合于沒多少money做IPG又想做“熱”的所謂蛋白質組的，嘻嘻！IEF用Biorad的圓盤電泳槽（不行用國產的吧，不推薦），SDS-PAGE用六一廠的就可以了（ft，六一廠應該給我money吧，給你做廣告
蛋白質雙向電泳(twodimensional－electrophoresis)過程與體會2
2.3.2 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）選用DYY-Ⅲ型（北京六一儀器廠生產）電泳槽（規格為200×200×1mm），分離膠濃度為12%，無濃縮膠。待膠聚合后，將電聚焦后已經平衡的膠條平放于濃縮膠頂端（避免膠條拉直），并用1%瓊脂糖（電極緩沖液配制）封膠，特別應注意避免膠條與
雙向電泳的定義
雙向電泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合，即先進行等電聚焦電泳（按照pH分離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心。雙向電泳由
雙向電泳的原理
蛋白質首先在薄條凝膠中通過等電聚焦分離。然后將凝膠水平放置在第二個平板狀凝膠上，通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質。水平分離反映了pI的差異；垂直分離反映了分子量的差異。因此，原始的蛋白質組成在兩個維度上擴散。使用雙向電泳技術可以分解數千種細胞蛋白質。可以從凝膠中切取出單個蛋白質點，并通過質譜
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（一）
試劑、試劑盒?尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材?等電聚焦儀 IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟 3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG (
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（二）
2. 在平板儀器上進行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit)滿足下列條件時，水化后的 IPG 膠條可以直接放在 IEF 儀器的冷卻板上：① 如果運行時間不超過 12 h ( 經常發生在寬的或中等 pH 范 圍 IPG，如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 pH 梯
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（三）
使用 IPGphor 進行 IEF 的典型工作條件見表13-2和 表 13-3 。正如前文指出的那樣 ，為了使高分子質量的蛋白質更好地進入聚丙烯酰胺膠內，水化時應在膠條兩端加低電壓（30~50 V ) ，否則將給水化上樣造成困難[ 15，28] 。然后電壓逐步升高至 8000 V。如果 IP
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（四）
3.3 第二向：多重垂直 SDS-PAGESDS-PAGE 可以在水平或垂直系統上進行 [29] 。水平設備適用于預制膠（ExcelGel SDS；Amersham Biosciences/ GE Healthcare) 。而垂直系統則應用于多塊膠平行進行的電泳中，尤其是大規模的蛋白質組分析
雙向電泳實驗
試劑、試劑盒 尿素去污劑儀器、耗材 聚丙烯酰胺凝膠實驗步驟 一、第一向1. 等電聚焦凝膠的準備雙向電泳通常用聚丙烯酰胺凝膠作介質，但需含有 8 mol/L 尿素、0.5%~2% 非離子或兩性離子去污劑。為了增加樣品的可溶性，可加 0.5% CHAPS。在第一向電泳中，最重要的是用載體兩性電解
雙向電泳實驗
ISO-DALT 方法 IPG-DALT 方法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 雙向電泳（two-dimensional electrophoresis）是等電聚焦電
雙向電泳的操作步驟
第一向等電聚焦⒈ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含IPG buffer）一小管（1ml/管），置室溫溶解。⒉ 在小管中加入0.01g DTT， 0.5% 對應膠條pH范圍的IPG buffer，充分混勻。⒊ 從小管中取出400微升水化上樣緩沖液，加入100微升樣品（
雙向電泳的實驗過程
實驗原理2-DE的第一向電泳等電聚焦是基于等電點不同而將蛋白粗步分離，第二向SDS-PAGE是基于蛋白質分子量不同，而將一向分離后的蛋白進一步分離。這樣就可以得到蛋白質等電點和分子量的信息。主要試劑1. BSA2. Bradford液3. DTT?4. 0.05% 的溴酚蘭?5. IPG buffe