融合蛋白的酶解實驗5
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSGST清洗緩沖液GST洗脫緩沖液儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. 在20或50 ml 帶球旋蓋的試管中，用20倍體積含1%Triton X-100的PBS液洗滌結合在谷胱甘肽-瓊脂糖珠的GST融合蛋白。室溫下，在臺式離心機上以500 g 離心10 s 沉淀瓊脂糖珠，小心棄上清，將谷胱甘肽-瓊脂糖珠重懸于20倍體積的Triton X-100緩沖液中，重復洗滌1次。2. 第二次離心后，小心棄上清，用20倍體積的GST洗滌緩沖液重懸谷胱甘肽-瓊脂糖珠。3. 離心沉淀并棄去上清，將谷胱甘肽-瓊脂糖珠重懸于20倍體積的凝血酶裂解緩沖液中，重復離心并再重懸于≤1 ml 的凝血酶裂解緩沖液中。 4. 取出一小份重懸的瓊脂糖珠，在其中加入等體積的2×SDS樣品緩沖液，-20℃貯存以備SDS-PAGE分析用。5. 將凝血酶以1%的比例加......閱讀全文
融合蛋白的酶解實驗5
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSGST清洗緩沖液GST洗脫緩沖液儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?在20或50 ml 帶球旋蓋的試管中，用20倍體積含1%Triton X-100的PBS液洗滌結合在谷胱甘肽-瓊脂糖珠的GST融合蛋白。室溫下，在臺式離心機上以500 g 離心10 s 沉淀
融合蛋白的酶解實驗
基本方案 輔助方案 備選方案1 輔助方案 備選方案2 備選方案3 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
融合蛋白的酶解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 SDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：?（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
融合蛋白的酶解實驗1
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間： ? （1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應
融合蛋白的酶解實驗2
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS鹽酸胍CaCl2 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度
融合蛋白的酶解實驗4
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS鹽酸胍CaCl2 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?將融合蛋白在≥10倍體積的20 mmol/l Tris·Cl（pH7.4）/6 mol/l 鹽酸胍中透析4 h，或將鹽酸胍加入融合蛋白中至終濃度
融合蛋白的酶解實驗3
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDS鈉鹽凝血酶裂解液凝血酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?準備兩個小量預試驗以確定最佳裂解反應條件：?（1）反應1：20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液（在合適的緩沖液中）及0.2 μg 凝血酶。（2）反應2：5 μl 1 mg/ml?融合蛋白溶液（模擬
融合蛋白的酶解實驗6
實驗材料融合蛋白試劑、試劑盒SDSCaCl2重組牛腸激酶儀器、耗材水浴鍋培養箱離心機實驗步驟1. ?做預試驗監測腸激酶與融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率，準備5個反應體系：?（1）反應1至4：20 μl 融合蛋白；0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK，加50 mmol/l Tris·Cl
融合蛋白酶解實驗
實驗方法原理 實驗材料?1 mg／ml 融合蛋白試劑、試劑盒?200 μg Xa 因子／ml 反應緩沖液2 × SDS 樣品緩沖液儀器、耗材?沸水浴實驗步驟 準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間。反應 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反應
融合蛋白酶解實驗
基本方案 用 Xa 因子 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 1 mg／ml 融合蛋白
融合蛋白酶解實驗_－用－Xa－因子
使用基因融合表達系統在大腸桿菌中表達外源基因已越來越受歡迎。其原因在很大程度上歸因于融合系統能夠產生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽轉移酶以及硫氧還蛋白均被證實能非常成功地生產正確折疊、有生物活性的蛋白質。其中每一種都備有方便的純化方法，可將融合蛋白與細胞污染物分開。所產生的蛋白質適用于進行其生物學
方案5－蛋白質的胰酶消化實驗
實驗材料凍干的目標蛋白質試劑、試劑盒CaCl2NH4HCO3苯甲基磺酰氟（PMSF)胰酶貯存液Tween-20儀器、耗材聚丙烯試管水浴箱實驗步驟1.凍干的蛋白質底物溶解在 1% 的碳酸氫銨中，控制使用盡量少的溶液體積，以達到較高的底物濃度。當蛋白質底物很微量（如小于 1mg) 時，加入 Tween-
GST－融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
GST－融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
GST－融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
谷胱甘肽S轉移酶融合蛋白的表達及純化實驗
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒氨芐青霉素LBPBSSDS甘油谷胱甘肽儀器、耗材離心機搖床轉子超聲波發生器實驗步驟1. ?按正確讀框將DNA片段亞克隆入合適的pGEX載體中，轉化大腸桿菌感受態細胞， 在LB/氨芐青霉素平皿上篩選轉化子，以不插入外源DNA的自連載體作對照，平皿置37℃孵育12~15 h。
谷胱甘肽S轉移酶融合蛋白的表達及純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒
谷胱甘肽S轉移酶融合蛋白的表達及純化實驗
實驗材料 大腸桿菌試劑、試劑盒 氨芐青霉素LBPBSSDS甘油谷胱甘肽儀器、耗材 離心機搖床轉子超聲波發生器實驗步驟 1. ?按正確讀框將DNA片段亞克隆入合適的pGEX載體中，轉化大腸桿菌感受態細胞， 在LB/氨芐青霉素平皿上篩選轉化子，以不插入外源DNA的自連載體作對照，平皿置37℃孵育12~1
融合蛋白的免疫篩選實驗
基本方案 IPTG法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
融合蛋白的免疫篩選實驗
實驗材料 大腸桿菌 試劑、試劑盒 LB頂層瓊脂糖疊氮鈉第一抗體 儀器、耗材 硝酸纖維素濾膜 實驗步驟 1. ?在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文庫的滴度，宿主菌為大腸桿菌LE392菌株，每個平板使用7 ml 1%LB頂層瓊脂。 2. ?選擇適當的滴度鋪平板，于
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少，尤其是當
GST融合蛋白的親和純化實驗
實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用 1/10 的 GST 融合體加樣做平行 SDS-PAGE 凝膠電泳并染色以便更確切地比較 GST 融合體蛋白帶。另外，融合蛋白的降解可能導致誘餌蛋白的量減少
GST融合蛋白的親和純化實驗
GST 共結合純化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 瓊脂糖顆粒和誘餌蛋白復合體在洗滌時并不會損失而且所有反應都含有等量的誘餌蛋白。為了證明在洗滌期間沒有任何材料損失，應使用
基因置換實驗——構建融合蛋白
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過
方案13－膠內蛋白質的酶解和肽段提取實驗
實驗材料在二維凝膠電泳中分離的蛋白質試劑、試劑盒膠內胰酶消化緩沖液三氟乙酸（TFA)儀器、耗材冷凍干燥離心機小離心管水浴鍋實驗步驟1.切下凝膠上的蛋白質點，放人小離心管中。2.以 0.lmol/L NH4HCO3、50% 乙腈（用于胰酶）或 0.05mol/L Tris-HCl(PH9.3)、50%
融合蛋白化學降解實驗
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 CNBr甲酸SDS 儀器、耗材 離心機分光光度計水浴鍋 實驗步驟 1. ?進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于5050 μl 50 mg/ml CNBr/甲酸中，另一份重懸于50 μl 含CNBr 的7
融合蛋白化學降解實驗
基本方案 備選方案1 備選方案2 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
融合蛋白化學降解實驗
基本方案 用溴化氰 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 1 mg ml 融合蛋白
關于αs1酪蛋白的酶解分析介紹
近年來，生物活性肽是酪蛋白研究的一個熱點，因為生物活性肽和其蛋白質母體相比，有更好的生理功效。生物活性肽被定義為能夠對身體的機能和情況產生積極影響，并可能最終影響人體健康的特殊的蛋白片段。生物活性肽在蛋白質中是沒有活性的，只有蛋白質被特定的酶水解，酰胺鍵斷裂，產生特定的氨基酸序列，生物活性被釋放
硫氧還原蛋白融合蛋白的表達和純化實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒