融合蛋白酶解實驗
基本方案 用 Xa 因子 實驗方法原理 實驗材料 1 mg／ml 融合蛋白 試劑、試劑盒 200 μg Xa 因子／ml 反應緩沖液 2 × SDS 樣品緩沖液 儀器、耗材 沸水浴 實驗步驟 1. 準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間。反應 1:20 μl......閱讀全文
融合蛋白酶解實驗
實驗方法原理 實驗材料?1 mg／ml 融合蛋白試劑、試劑盒?200 μg Xa 因子／ml 反應緩沖液2 × SDS 樣品緩沖液儀器、耗材?沸水浴實驗步驟 準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間。反應 1:20 μl 含有 1 μl 200μg /ml Xa 因子的 1 mg/ml 融合蛋白反應
融合蛋白酶解實驗
基本方案 用 Xa 因子 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 1 mg／ml 融合蛋白
融合蛋白酶解實驗_－用－Xa－因子
使用基因融合表達系統在大腸桿菌中表達外源基因已越來越受歡迎。其原因在很大程度上歸因于融合系統能夠產生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽轉移酶以及硫氧還蛋白均被證實能非常成功地生產正確折疊、有生物活性的蛋白質。其中每一種都備有方便的純化方法，可將融合蛋白與細胞污染物分開。所產生的蛋白質適用于進行其生物學
細胞融合實驗
實驗概要掌握細胞融合原理、應用融合細胞的方法以及細胞融合率的計算。實驗原理細胞融合(Cell ?fusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學的)使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合，在六十年代作為一門新興技術而發展起來。由于它不僅能產生同種細胞融合，也
細胞融合實驗
實驗方法原理細胞融合的誘導物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應用zui廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡便，且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不完全清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發生結
細胞融合實驗的實驗原理
根據Burnet的抗體選擇學說，一個B淋巴細胞只能產生一種針對它能夠識別的特異性抗原決定簇的抗體。從一個祖先B細胞分裂繁殖而形成的純細胞系稱為克隆。來自克隆系的細胞基因是完全相同的，產生的抗體也完全相同。這種從一株克隆系產生的性質相同的均一抗體稱為單克隆抗體。但這種具有分泌功能的B淋巴細胞難以在
體細胞融合實驗——懸浮培養細胞的融合
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG1000儀器、耗材離心管實驗步驟1. 從無血清培養基中沉淀雜交前體細胞。2. 倒盡上清。3. 用手指彈撥管底或雙手搓轉離心管，使細胞重新懸浮。4. 加入 1 ml PEG1000，待 2 分鐘。5. 加入 5 ml 含 10% FBS 的培養基稀釋 PEG。于室溫，20
體細胞融合實驗——單層培養細胞的融合
實驗材料細胞試劑、試劑盒PEG-1000儀器、耗材培養基實驗步驟1. 以適當的培養基培養細胞至接近匯合成片的密度（80% 匯合率）。2. 吸干 60 mm 規格平皿或 T-25 培養瓶中的培養基，加 2 ml 50% PEG-1000，輕輕轉動 1 分鐘讓該粘稠液體覆蓋所有細胞。3. 往培養皿或瓶中
GST－融合蛋白沉降實驗
實驗材料 細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒 裂解緩沖液SDS 聚丙烯酰胺凝膠探針GST 蛋白儀器、耗材 沸水浴翻轉祥品旋轉儀谷胱甘肽瓊脂糖球珠實驗步驟 材料緩沖液和溶液將緩沖液稀釋到適當濃度。裂解緩沖液20 mmol/LTris-Cl(pH8.0)200 mml/L NaCl1 mm
體細胞融合實驗
單層培養細胞的融合 懸浮培養細胞的融合 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞 試劑、試
GST－融合蛋白沉降實驗
GST 沉降實驗與 far western(方案 2) 相比有—個優點：探針蛋白是在更自然的環境下與可能的搭檔蛋白孵育，因而增強了相互作用的有效性。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料細胞裂解液其中蛋白質 35S 用標記試劑、試劑盒裂解
體細胞融合實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 PEG-1000儀器、耗材 培養基實驗步驟 1. 以適當的培養基培養細胞至接近匯合成片的密度（80% 匯合率）。2. 吸干 60 mm 規格平皿或 T-25 培養瓶中的培養基，加 2 ml 50% PEG-1000，輕輕轉動 1 分鐘讓該粘稠液體覆蓋所有細胞。3. 往培養
體細胞融合實驗
單層培養細胞的融合 懸浮培養細胞的融合 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞 試劑、試
GST－融合蛋白沉降實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞裂解液 其中蛋白質 35S 用標記 試劑、試劑盒 裂解緩沖液 SDS 聚丙烯酰胺凝膠
細胞融合實驗的實驗原理簡介
根據Burnet的抗體選擇學說，一個B淋巴細胞只能產生一種針對它能夠識別的特異性抗原決定簇的抗體。從一個祖先B細胞分裂繁殖而形成的純細胞系稱為克隆。來自克隆系的細胞基因是完全相同的，產生的抗體也完全相同。這種從一株克隆系產生的性質相同的均一抗體稱為單克隆抗體。但這種具有分泌功能的B淋巴細胞難以在
細胞融合實驗的實驗步驟介紹
1. DMEM或1640基礎培養基、PEG溶液置于37℃水浴中預溫； 2. 將Balb/c小鼠摘眼球處死后，浸入75%灑精； 3. 無菌取免疫小鼠的脾臟； 4. 脾臟用PBS洗滌后，放入無菌過濾的網篩，再把網篩放在盛有完全培養基的玻璃平皿中用研磨棒（或注射器針管）輕輕研磨或擠壓，使其通過網
動物細胞融合實驗
細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的過程。在自然情況下，體內和體外培養的細胞均能發生自發融合現象。人工方法誘導細胞融合開始于50 年，現在這項技術已成為研究細胞遺傳、細胞免疫，腫瘤及細胞工程的重要手段。在誘導物（如仙臺病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的細胞發生凝集，隨后在質膜接
融合蛋白的酶解實驗
實驗材料 融合蛋白試劑、試劑盒 SDS儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：?（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（
基因置換實驗——構建融合蛋白
實驗材料菌株BY4741質粒PDB118試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材YPD 平板YPD 液體培養基血球計數板SC-his平板實驗步驟YPD 平板 第 1 天將菌株 7-3 在 YPD 平板上劃單克隆，30°C 下培養兩天。第 3 天挑取單克隆，在 5 mlYPD 液體培養基中培養，30°C 過
動物細胞融合實驗
一、實驗目的細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的過程。在自然情況下，體內和體外培養的細胞均能發生自發融合現象。人工方法誘導細胞融合開始于50年，現在這項技術已成為研究細胞遺傳、細胞免疫，腫瘤及細胞工程的重要手段。通過實驗，了解細胞融合的原理，掌握細胞融合的基本方法。二、實驗原理在誘導物
融合蛋白的酶解實驗
基本方案 輔助方案 備選方案1 輔助方案 備選方案2 備選方案3 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 融合蛋白
溫胰蛋白酶解離組織
方案12.5 溫胰蛋白酶解離組織實驗方法原理組織切碎后于胰蛋白酶中攪拌數小時，每隔半小時收集已分離的細胞，離心后加入含血清的培養基。實驗材料組織 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DBSS ? ? ? ?
溫胰蛋白酶解離組織
實驗方法原理組織切碎后于胰蛋白酶中攪拌數小時，每隔半小時收集已分離的細胞，離心后加入含血清的培養基。實驗材料組織DBSS粗制胰蛋白酶D-PBSA試劑、試劑盒生長培養基皮氏平皿儀器、耗材培養瓶離心管瓶子磁力攪拌機鑷子移液管血球計數儀實驗步驟1. 將組織（1~5 g）移入加有新配制的無菌 DBSS （5
冷胰蛋白酶解離組織
經驗交流（0）實驗方法原理剪碎的組織放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后溫育并于溫培養基中分散細胞。實驗材料組織 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DBSS ? ? ? ? ? ?
溫胰蛋白酶解離組織
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 組織切碎后于胰蛋白酶中攪拌數小時，每隔半小時收集已分離的細胞，離心后加入含血清的培養基。 實驗材料 組織 DBSS
冷胰蛋白酶解離組織
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 剪碎的組織放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后溫育并于溫培養基中分散細胞。 實驗材料 組織 DBSS
冷胰蛋白酶解離組織
實驗方法原理 剪碎的組織放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后溫育并于溫培養基中分散細胞。實驗材料 組織DBSS粗制胰蛋白酶試劑、試劑盒 生長培養基皮氏平皿儀器、耗材 培養瓶鑷子移液管錐形瓶剪刀冰浴實驗步驟 1. 將組織（1~5 g，預先稱重）移入加有新配制的無菌 DBSS 的皮
冷胰蛋白酶解離組織
實驗方法原理剪碎的組織放在胰蛋白酶中于4°C 放置16~18h ，去除胰蛋白酶后溫育并于溫培養基中分散細胞。實驗材料組織DBSS粗制胰蛋白酶試劑、試劑盒生長培養基皮氏平皿儀器、耗材培養瓶鑷子移液管錐形瓶剪刀冰浴實驗步驟1. 將組織（1~5 g，預先稱重）移入加有新配制的無菌 DBSS 的皮氏培養皿中
融合蛋白的免疫篩選實驗
基本方案 IPTG法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 大腸桿菌
融合蛋白的酶解實驗1
實驗材料 融合蛋白 試劑、試劑盒 SDS 儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機 實驗步驟 1. ?準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間： ? （1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應