酸化丙酮／甲醇沉淀法實驗
TCA 沉淀的另一有用的替代方法是使用酸化的丙酮-甲醇混合液。酸化有助于通過將去垢劑溶于有機相而蛋白質產生沉淀以去除樣品中的 SDS。丙酮和甲醇都能以任何比例溶解于水中，因此不會發生相分離。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒鹽酸丙酮甲醇實驗步驟材料鹽酸（高純；如 J,T-Baker 的 Ultrex 級)丙酮（高純；如 Aldrich 的金標級)甲醇（高純；如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售級)操作程序本操作程序是根據 Current Protocolsin Molecular Biology —書改進而成的1) 配制酸化丙酮：丙酮 &n......閱讀全文
酸化丙酮/甲醇沉淀法實驗
試劑、試劑盒 鹽酸丙酮甲醇實驗步驟 材料鹽酸（高純；如 J,T-Baker 的 Ultrex 級)丙酮（高純；如 Aldrich 的金標級)甲醇（高純；如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售級)操作程序本操作程序是根據 Current Protocolsin Molecu
酸化丙酮/甲醇沉淀法實驗
酸化丙酮/甲醇沉淀法實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 鹽酸 丙酮 甲醇
酸化丙酮/甲醇沉淀法實驗
試劑、試劑盒 鹽酸丙酮甲醇實驗步驟 材料鹽酸（高純；如 J,T-Baker 的 Ultrex 級)丙酮（高純；如 Aldrich 的金標級)甲醇（高純；如 Aldrich 或 Burdick&Jackson 的最同市售級)操作程序本操作程序是根據 Current Protocolsin Molecu
酸化丙酮/甲醇沉淀法實驗
TCA 沉淀的另一有用的替代方法是使用酸化的丙酮-甲醇混合液。酸化有助于通過將去垢劑溶于有機相而蛋白質產生沉淀以去除樣品中的 SDS。丙酮和甲醇都能以任何比例溶解于水中，因此不會發生相分離。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒鹽酸丙酮甲醇實驗步驟材料鹽酸（高純；如 J,T
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗——丙酮沉淀法
實驗材料含蛋白質的樣品試劑、試劑盒丙酮（或其他有機溶劑如乙醇或甲醇）儀器、耗材Eppendorf 管（小塑料離心管）Eppendorf 管離心機（小型臺式離心機）混旋器實驗步驟1. 加 1 ml冷丙酮（-20℃）至 200 ul 樣品溶液，混勻。2. -20℃： 放置 10 min。3. 小型臺式離
丙酮沉淀法具體怎么做
1、在4度下，1：1或相應比例向蛋白質中加入丙酮（一般用20%-50%的丙酮沉淀蛋白），在冰域中溫和的攪拌10-15分鐘；2、低溫10000g離心10分鐘，除去上清液，用以沉淀體積的2倍體積的冷緩沖液懸浮。丙酮沉淀應該注意的是：1、此過程容易使蛋白質變性，所以有很多情況下復溶的時候會出現沉淀不溶的現
住區大氣中甲醇、丙酮衛生檢驗標準方法（氣相色譜法）
居住區大氣中甲醇、丙酮衛生檢驗標準方法(氣相色譜法)標準號：GB/T11738-89本標準規定了用氣相色譜法測定居住區大氣中甲醇、丙酮的濃度。本標準適用于居住區大氣中甲醇、丙酮濃度的側定。檢出下限對甲醇、內酮的檢出下限為2*10-3(進1ul樣品溶液)。當采樣體積為5L時，甲醇、丙酮zui低檢出濃度
沉淀DNA的實驗——乙醇沉淀法
沉淀DNA的實驗可應用于分離DNA。實驗方法原理DNA 溶液是DNA以水合狀態穩定存在，當加入乙醇時,乙醇會奪DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混 合,其乙醇的最終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代懈水乙醇(因為無水乙醇的價格遠遠比9
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料 測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒 二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材 螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟 這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒二硫蘇糖醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?碘代乙酰
磷酸化蛋白鑒定實驗
實驗材料測序級膜蛋白酶試劑、試劑盒二硫蘇糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯儀器、耗材螯合瓊脂糖凝膠層析介質實驗步驟這里所述的方法概括為下列幾個步驟：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性組分中的蛋白質（見 24. 3.1 )；固相金屬螯合親和層析（IMAC) 富集磷酸肽（見 24. 3. 2 )；用串聯質譜對磷酸
丙酮酸激酶的測定實驗
實驗方法原理 PK，ATP：丙酮酸磷酸轉移酶。有其他激酶的伴隨，這個反應的直接實驗：例如，可以應用 P32 標記。由分光光度測定出，這個反應與 LDH 反應偶聯，繼續 NADH 的氧化反應：實驗材料 酶樣品試劑、試劑盒 三乙醇胺-HCl KOHKClMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸ADPNADHLDH儀器
丙酮酸激酶的測定實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 PK，ATP：丙酮酸磷酸轉移酶。有其他激酶的伴隨，這個反應的直接實驗：例如，可以應用 P32 標記。由分光光度測定出，這個反應與 LD
苯丙酮尿定性檢查實驗
實驗方法原理 苯丙酮酸與三價鐵離子產生藍色反應，干擾顯色導致假陰性反應的磷酸鹽被變成磷酸銨鎂而除去．試劑、試劑盒 三氯化鐵溶液磷酸鹽沉劑依鹽酸實驗步驟 一、實驗試劑：1、三氯化鐵溶液，稱取FeCl6?6H2O 10g，用蒸餾水溶解并稀釋至100毫升．2、磷酸鹽沉劑：取氯化鎂（MgCl2?6H2O）2
苯丙酮尿定性檢查實驗
實驗方法原理苯丙酮酸與三價鐵離子產生藍色反應，干擾顯色導致假陰性反應的磷酸鹽被變成磷酸銨鎂而除去．試劑、試劑盒三氯化鐵溶液磷酸鹽沉劑依鹽酸實驗步驟一、實驗試劑：1、三氯化鐵溶液，稱取FeCl6?6H2O 10g，用蒸餾水溶解并稀釋至100毫升．2、磷酸鹽沉劑：取氯化鎂（MgCl2?6H2O）2.3克
丙酮酸激酶的測定實驗
實驗方法原理PK，ATP：丙酮酸磷酸轉移酶。有其他激酶的伴隨，這個反應的直接實驗：例如，可以應用 P32?標記。由分光光度測定出，這個反應與 LDH 反應偶聯，繼續 NADH 的氧化反應：實驗材料酶樣品試劑、試劑盒三乙醇胺-HCl KOHKClMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸ADPNADHLDH儀器、耗材
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗——三氯醋酸沉淀法
實驗材料含蛋白質的樣品試劑、試劑盒100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30 min （或在冷凍
有機溶劑沉淀法濃縮蛋白質實驗——有機溶劑沉淀法
實驗方法原理將有機溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白質溶液時，和高濃度鹽類似產生沉淀，這是因為它們能夠降低蛋白質的溶解度。在溫度為 10 ℃ 左右時蛋白質在有機溶劑中容易變性，所以在沉淀時必須特別注意冷卻溶液和離心轉頭（0 ℃～4 ℃ 為佳），建議離子強度為 0.05～0.2 mol/L。有機溶劑的濃度按體
表達蛋白檢測實驗_免疫沉淀法
實驗方法原理使用強大的晚期基因啟動子表達的重組蛋白可以用放射性氨基酸標記，再用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。當使用早期或晚期基因啟動子時，利用標記蛋白免疫沉淀能提高靈敏性和特異性。試劑、試劑盒磷酸緩沖液（PBS）細胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸儀器、耗材完全 MEM-5 培養基（含和不含蛋氨
酶法檢測磷酸化實驗
實驗方法原理實驗材料?含 100～200 μg 總蛋白的樣品試劑、試劑盒? 50 mmol L NN'-2-羥丙磺酸哌嗉(PIPES)Sephadex G-25 柱（可選）PIPES 2－ME 或 RPERS DTT 緩沖液馬鈴薯酸性磷酸酶2 × SDS－PAGE 樣品緩沖液100 mmol
酶法檢測磷酸化實驗
基本方案1 非特異酸性磷酸酶消化磷酸蛋白質 基本方案2 絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶消化磷酸蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理實驗材料 含 100～200 μg 總蛋白的樣品 試
磷酸化位點分析實驗磷酸化位點的確定
磷酸肽的化學測序 磷酸肽的質譜分析 源后衰變 用酶和化學方法去磷酸化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 磷酸化位點的確定也使用一
磷酸化位點分析實驗磷酸化位點的確定
實驗方法原理 磷酸化位點的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質被純化，如果可能蛋白質要均一；磷蛋白被特異性的化學或酶反應切斷、產生肽混合物，其中含有一到兩個磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內磷酸化的殘基。上面所述的分離方法， 2D-PP 作圖、 HPLC 或 l
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌，以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物，蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說，純化的蛋
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌，以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物，蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說，純化的蛋白質
免疫沉淀法濃縮蛋白質實驗
免疫沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過免疫沉淀，用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物，第二步加入經化學固定
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 含蛋白質的樣品
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
實驗方法原理 實驗材料?含蛋白質的樣品試劑、試劑盒?100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸餾水）實驗步驟 1. 在 1ml 樣品中至少要含有 5mg 蛋白質。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混勻；2. 將蛋白質在冰浴中沉淀 30
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理 核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料 待純化樣本試劑、試劑盒 醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟 實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）4
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料待純化樣本試劑、試劑盒醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）408.1