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    檢測細胞凋亡的實驗方法比較4

    六、Caspase-3活性的檢測 Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase-3為關鍵的執行分子,它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,在凋亡的早期階段,它被激活,活化的Caspase-3由兩個大亞基(17KD)和兩個小亞基(12KD)組成,裂解相應的胞漿胞核底物,最終導致細胞凋亡。但在細胞凋亡的晚期和死亡細胞,caspase-3的活性明顯下降。 1 Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化的Caspase-3及對底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]等的裂解。 方法: 收集細胞→PBS洗滌→抽提細胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE電泳→硝酸纖維素膜或PVDF膜轉移→5%脫脂奶粉封閉,室溫1.5~2h或4°C過夜→Caspase-3......閱讀全文

    細胞凋亡實驗

    細胞凋亡(Apoptosis) 又稱程序性細胞死亡(Programmed Cell Death,PCD)是指細胞基因調控的一種自主性的自殺現象。即是在一定的生理或病理條件下,遵循自身的程序,自主結束生命的死亡方式。凋亡一詞最早是由年澳大利亞組織病理學家John Kerr通過研究大鼠肝左葉細胞死亡時,

    檢測細胞凋亡的實驗方法比較-2

    二、細胞凋亡的細胞化學測定細胞凋亡的細胞化學測定包括細胞表面(細胞膜)的結構和通透性改變的測定和細胞核DNA改變的測定。根據應用的范圍,又可分為細胞群休和單個細胞測定兩種,以下僅介紹其中幾種較為常用的方法。碘化丙啶(propidium iodide,PI)檢測早期死亡細胞膜通透性狀態的不同是區分細胞

    六種染色后光鏡觀察法檢測肝癌細胞凋亡

    作者:楊連君,司曉輝,王文亮,王文勇,趙一嶺,方正清[摘  要] 目的:探討簡便易行的在光鏡下通過形態學觀察檢測細胞凋亡的方法,并對其進行比較。方法:首先用6%的乙醇作用6 h誘導人肝細胞癌細胞系HCC9204細胞凋亡,然后進行未固定細胞的臺盼藍染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)雙染色,

    凋亡細胞核DNA片段檢測方法進展(一)

    摘  要:當今生物學領域的研究一個熱點之一是細胞凋亡。開展對細胞凋亡的研究,首先要解決是方法學問題。作者從凋亡細胞的特征性核DNA片段檢測著手,闡述了多種凋亡細胞核DNA片段檢測方法以及近年來的一些新進展。細胞凋亡(apoptosis)又稱細胞凋謝或稱程序性細胞死亡(Programmed

    定量分析晚期細胞凋亡中DNA片段的直接方法

    多細胞生物是由高度組織化的細胞群落組成的,為了這個細胞群落的茁壯成長,重要的是1.通過復雜的細胞過程,如細胞增殖和凋亡,2.建立穩態。這兩個過程中任何一個過程的不適當轉變都會導致疾病。例如,神經元凋亡活性的增加是各種神經退行性疾病如阿爾茨海默氏癥和帕金森氏癥的根源。相反,凋亡機制的喪失會導致細胞過度

    細胞活力檢測方法

    細胞活性是判斷體外培養細胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標,如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養條件變化等。細胞活性檢測方法有很多種,如臺盼藍染色法、克隆(集落)形成法、、ATP含量測定法、熒光染色法、比色法(MTT法)等。一、ATP含量測定法---生物發光檢測有研究表明內源性三磷酸腺苷 (AT

    如何利用酶標儀進行細胞增殖與活力測定

      酶標儀在細胞生物學與藥物篩選方面有著非常高的使用頻率,而在各種細胞檢測實驗中,細胞增殖能力的檢測是最為常見也是最基礎的檢測之一。   ●為什么要檢測細胞狀態呢?    細胞狀態是直接反應細胞生理狀態的重要指標,通過監測細胞在各種化合物刺激作用下的反應狀態,從而確定測試分子是否對細胞增殖有影

    高內涵成像技術在網絡集成式細胞內特征的......(二)

                   圖3 單細胞耗氧率動態代謝檢測及分析 一步染色法檢測細胞對藥物的敏感性 應用ImageXpress?

    微核實驗在染色體水平檢測DN A損傷實驗

    實驗步驟 一、材料 1. 胞質分裂阻滯微核試驗 2. 微核的著絲點檢測 (1)從硬皮病 C R E S T 亞型的患者中取得的血清樣本。 (2) F I T C 標記的兔抗人 I g G 二抗。 (3) 過氧化物酶

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟

    實驗概要通過本實驗掌握傳代細胞培養的基本方法,了解無菌操作的基本原則。掌握磷酸鈣介導的貼壁細胞的通用轉染方法。了解細胞凋亡的形態特征,掌握細胞凋亡DNA梯度(“DNA Ladder”)電泳檢測法。實驗原理細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和方法

    細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等;二是可以人為地嚴格控制研究條件,便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響,有利于單因子分析;三是研究的樣本可以達到比較均一性。

    活體生物發光成像技術的最新進展

    活體動物體內光學成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物發光(bioluminescence)與熒光(fluorescence)兩種技術。生物發光是用熒光素酶(Luciferase)基因標記細胞或DNA,而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP, Cyt及dyes等)進

    細胞凋亡研究

    前言:細胞凋亡是細胞程序性死亡中最具特征性的一種。它在生物發展,體內平衡,甚至在不同的疾病,例如:癌癥,的發病機制都扮演著重要的角色。在過去的幾十年里,科學家們對細胞凋亡進行了廣泛的研究。細胞凋亡的過程中,細胞會有不同的形態變化。同時,細胞膜(plasma membrane),線粒體(mitocho

    微核實驗在染色體水平檢測DNA損傷實驗(一)

    實驗步驟一、材料1. 胞質分裂阻滯微核試驗2. 微核的著絲點檢測(1)從硬皮病 C R E S T 亞型的患者中取得的血清樣本。(2) F I T C 標記的兔抗人 I g G 二抗。(3) 過氧化物酶標記的兔抗人 I g G 。(4) 二胺基聯苯溶液(D A B ): I m g /m L 溶于

    流式細胞術的工作原理與發展綜述

    摘要:流式細胞術(flow cytometry, FCM)是以流式細胞儀為檢測手段的一項能快速、精確的對單個細胞理化特性進行多參數定量分析和分選的新技術。是一項多學科交叉研究的結晶。流式細胞術及流式細胞儀的出現融合了醫學,計算機學,物理學等眾多學科背景。。它不僅測量速度快、準確度好、靈敏度高,而且還

    生物發光技術在生命科學中的應用

      隨著發光(luminescence)技術在多種生物實驗中的廣泛應用,生物發光(bioluminescence)技術越來越成為首選的生物檢測手段。在這篇文章中,我們將詳細討論生物發光技術在生物檢測中的應用,以及它與其它發光檢測手段相比所顯示出的優點。   1 生物發光的特點   根據產生光子的

    生物發光技術在生命科學中的應用

      隨著發光(luminescence)技術在多種生物實驗中的廣泛應用,生物發光(bioluminescence)技術越來越成為首選的生物檢測手段。在這篇文章中,我們將詳細討論生物發光技術在生物檢測中的應用,以及它與其它發光檢測手段相比所顯示出的優點。   1 生物發光的特點   根據產生光子的

    動物細胞培養及外源基因導入的原理和操作步驟(一)

    實驗原理細胞培養是現代生物學研究中應用最為廣泛的技術之一。它的突出優點,一是研究對象是活的細胞,可長時期地監控、檢測甚至定量評估其形態、結構和生命活動等;二是可以人為地嚴格控制研究條件,便于研究各種物理、化學、生物等外界因素對細胞生長、發育和分化等的影響,有利于單因子分析;三是研究的樣本可以達到比較

    干細胞實驗技術入門

    《Science》剛剛公布的十大科學突破中,占據首位就是細胞重新編程技術(iPS,induced pluripotent stem cells),這一才初初“面世”一年的干細胞 技術引發了生命科學研究領域的極大震動,引用《科學》雜志負責新聞的副主編Robert Coontz的話就是“這項研

    R&D Systems試劑 Q&A 常見問題解答 (1)

    問:R&amD Systems有分裝試劑嗎?答:沒有分裝試劑。R&amD Systems公司不會分裝,也沒有授權任何公司進行分裝。目前市場上所謂的“RD分裝試劑”是沒有品質保證的3無產品,R&amD Systems公司不承擔任何“RD分裝試劑”的售后服務。在此,建議廣

    Transwell侵襲實驗

    第一節 概念這里想明確兩個概念,一個是Transwell,另一個是腫瘤細胞侵襲模型。1. Transwell關于Transwell這個詞該如何解釋,查了很多資料也未見準確的注解,我覺得可以這么理解吧,trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思,well有小室的意思,可以從字面上理解,這是一類有通透

    乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒使用說明

    乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒產品編號產品名稱包裝C0017乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒500次產品簡介:一基的乳酸脫氫酶細胞毒性檢測試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也稱乳酸脫氫酶檢測試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒(LDH Relea

    R&D Systems試劑 Q&A 常見問題解答(二)

     細胞凋亡 問:為什么有兩套不同的TUNEL試劑盒?答:因為有兩種不同的TUNEL方法可檢測細胞凋亡。第一種方法采用TdT酶(末端脫氧核苷酸轉移酶)將生物素化的核苷酸加到組織中的DNA片段的3'-羥基端。加入正離子可使這種標記更有效,經生物素化的核苷酸可用streptav

    流式細胞儀檢測細胞凋亡方法(Annexin V 法)

    實驗概要Annexin V是一種檢測細胞凋亡的試劑,本實驗介紹了一個用流式細胞儀檢測細胞凋亡的方法(Annexin V 法)。實驗原理Annexin V是檢測細胞凋亡的靈敏指標之一。它是一種磷脂結合蛋白,可以與早期凋亡細胞的胞膜結合,而細胞質膜的改變是細胞發生凋亡時最早的改變之一。在細胞發生凋亡

    微核實驗在染色體水平檢測DN A損傷實驗(二)

    2 用阿糖胞苷微核實驗檢測人淋巴細胞 (V G 1 期 DNA 剪切修復損傷的方法在對暴露于各種遺傳毒物的人 G 。期淋巴細胞的 M N 進行檢測后發現,對于主要引起堿基損傷和 DNA 加合物而不是 DNA 鏈斷裂或者紡錘體損傷的化學物質和紫外輻射而言, MN 的形成與細胞毒性相比明顯程度較

    流式細胞術在血液學中的應用

      DNA倍體分析及細胞周期分析    在細胞周期內,DNA含量隨細胞內時相發生周期性變化,正常情況下,大多數細胞處于休止期(Go), G1期細胞雖有DNA合成,但DNA含量仍為2N,為二倍體細胞,;處于活躍的DNA合成期(S期)的細胞DNA含量為2N-4N;正經歷細胞分裂(G2/M期)的細胞

    流式細胞術常見問題問答

    1、流式細胞儀上的FL2-W FL2-A FL2-H 分別是做什么的?FL2-W是只檢測熒光的脈沖寬度, FL2-H是指脈沖高度。通常在做細胞周期分析時應用,用于去除粘連細胞。2、流式同型對照怎樣選擇?同型對照(Isotype Control):使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免

    ImageXpress Micro高內涵3D細胞球成像檢測手冊(一)

    一、概述1 當前細胞培養和觀察的常用方法十九世紀起,當顯微鏡出現后,人們就開始嘗試對細胞結構進行觀察,并在二十世紀發展出細胞的培養技術。單層細胞的培養相對方便,而且商業化的顯微鏡非常適合于平面的、薄樣品的觀察,所以,在二十世紀的中后期,人們普遍采用 2D 的細胞培養方法,進行生物學的研究,以及進

    腦力智寶對實驗性腦缺血大鼠學習記憶與神經細胞凋亡...

    腦力智寶對實驗性腦缺血大鼠學習記憶與神經細胞凋亡的影響【摘要】  目的研究腦力智寶對實驗性腦缺血大鼠學習記憶功能與神經細胞凋亡的影響。方法結扎實驗大鼠雙側頸總動脈制作腦缺血模型,Morris水迷宮法測試其學習記憶功能,HE染色法觀察其神經細胞形態學改變,TUNEL法檢測凋亡細胞。

    細胞狀態差的三大原因實例分析

    我們在做技術支持時常常接到用戶來電:“老師,我的細胞狀態很差,不知道怎么了,您能幫我分析下原因嗎?” 細胞狀態很差,常常出現的現象是:細胞邊緣不清晰、細胞不飽滿、折光性差、背景比較臟、黑點很多、細胞碎片多(細胞凋亡后的細胞碎片)、單個細胞內有空泡(凋亡)且空泡比較多;如果細胞出現老化,也就

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