雙向電泳的新進展和新工具
隨著蛋白質組學概念的提出，雙向電泳(2D gel electrophoresis)一度曾變得很流行。近幾年，因質譜技術的快速發展，LC-MS的熱度似乎更高。然而，在某些應用上，雙向電泳更有優勢。 雙向電泳提供了整個樣品的鳥瞰圖，而這是質譜無法比擬的。它可以對樣品中復雜的蛋白質進行整體性的分離，是目前唯一可以在一塊凝膠上同時分離成千上萬個蛋白質的方法，且分離得到的蛋白質組分的純度可以達到90%以上。通過它，您可以研究和比較蛋白質組在某些條件下如何變化。 此外，雙向電泳分離完整的蛋白，而大部分質譜方法都是研究肽段。因此，開展質譜分析的研究人員很難確定翻譯后修飾事件，如兩個不同的翻譯后修飾是同時存在，還是互相排斥。當然，這兩種技術在費用和設備要求上也不能同日而語。雙向電泳的設備與質譜儀相比，簡直是小巫見大巫。而且，質譜儀還需要專門的人員來操作，沒有一定的經驗可不敢貿然出手。 當然，雙向電泳的重復性也是個無法回......閱讀全文
蛋白質技術——雙向電泳
實驗概要蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. ?雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1000個E.coli蛋白，并表明蛋白質譜不是穩定的，而是隨環境而變化. ?雙向電泳原理簡明，第一向進行等電聚焦，蛋白質沿pH梯度分離，至各自的等電點；隨后，再沿垂直的方向進行分子
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗
試劑、試劑盒尿素裂解溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? IPG 干膠條水化液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗
試劑、試劑盒尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材等電聚焦儀IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG ( IPG
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（二）
2. 在平板儀器上進行 IPG-IEF ( Multiphor ll Unit)滿足下列條件時，水化后的 IPG 膠條可以直接放在 IEF 儀器的冷卻板上：① 如果運行時間不超過 12 h ( 經常發生在寬的或中等 pH 范 圍 IPG，如 IPG 3~10 或 4~7 ) 。② 如果 pH 梯
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（三）
使用 IPGphor 進行 IEF 的典型工作條件見表13-2和 表 13-3 。正如前文指出的那樣 ，為了使高分子質量的蛋白質更好地進入聚丙烯酰胺膠內，水化時應在膠條兩端加低電壓（30~50 V ) ，否則將給水化上樣造成困難[ 15，28] 。然后電壓逐步升高至 8000 V。如果 IP
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（一）
試劑、試劑盒?尿素裂解溶液IPG 干膠條水化液IPG 膠條平衡液SDS 凝膠緩沖液電極緩沖液儲液丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺溶液過硫酸銨溶液瓊脂糖溶液儀器、耗材?等電聚焦儀 IPGphor多重垂直 SDS 電泳儀實驗步驟 3.1 第一向：在 IPG 膠條中進行等電聚焦（ IPG-IEF)采用 IPG (
植物蛋白質組學中的雙向電泳技術實驗（四）
3.3 第二向：多重垂直 SDS-PAGESDS-PAGE 可以在水平或垂直系統上進行 [29] 。水平設備適用于預制膠（ExcelGel SDS；Amersham Biosciences/ GE Healthcare) 。而垂直系統則應用于多塊膠平行進行的電泳中，尤其是大規模的蛋白質組分析
蛋白質的雙向電泳實驗
等電聚焦法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離;
蛋白質的雙向電泳實驗
實驗方法原理 蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離; 第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后, 可以得到蛋白質分子的等電點
蛋白質雙向電泳過程與體會
蛋白質雙向電泳過程與體會?雙向電泳IEF (sigma) IEF（not IPG）/SDS-PAGE最簡單的裝備推薦如下，適合于沒多少money做IPG又想做“熱”的所謂蛋白質組的，嘻嘻！?IEF用Biorad的圓盤電泳槽（不行用國產的吧，不推薦），SDS-PAGE用六一廠的就可以了（ft，六一廠應
蛋白質雙向電泳過程與體會
??? 雙向電泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最簡單的裝備推薦如下,適合于沒多少money做IPG又想做“熱”的所謂蛋白質組的.? ? IEF用Biorad的圓盤電泳槽（不行用國產的吧,不推薦）,SDS-PAGE用六一廠的就可以了（ft,六一廠應該給我money吧,
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。注意事項：1. 一向聚焦與二
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。注意事項：1. 一向聚焦與二向電泳之
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。 注意事項： 1
蛋白質的雙向電泳實驗方法
第一向（等電點聚焦，IEF）1）凝膠條的準備1．以帽凝膠端（2個校準環：4mm和10mm）朝下，將4根玻璃管插入兩個凝膠灌注裝置的每個托架中，這樣玻璃管恰好站在兩個分隔室之一的“充填船”上。從玻璃管頂端到玻璃管底端拉入PP線（小心，線不易移動），否則以后將不能用它們將膠溶液拉上來。2．溶解分離膠溶液
蛋白質的雙向電泳注意事項
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦（Isoelectrofocusing, IEF）,根據蛋白質的等電點不同進行分離；第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后，可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。 注意事項： 1
蛋白質的雙向電泳實驗_等電聚焦法
蛋白質的雙向電泳的第一向為等電聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根據蛋白質的等電點不同進行分離; 第二向為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳( SDS-PAGE ) , 按亞基分子量大小進行分離。經過電荷和分子量兩次分離后, 可以得到蛋白質分子的等電點和分子量信息。本實驗目的是
蛋白質組和蛋白質組學分析
?隨著人類基因 組計劃研究成果的公布，人們對基因的認識逐漸清晰，但基因數量的有限性和基因結構的相對穩定性，與生命現象的復雜性和多樣性之間存在巨大反差。如何了解眾多的基因與危害人類身心健康的疾病之間的關系，對生命科學研究者來說仍是一項長期而艱巨的任務。因此，作為生命活動的直接承擔者――蛋白質，成為后基
蛋白質組與蛋白質組學簡介2
3 甲基化干擾實驗用來檢測蛋白質的結合位點。甲基化修飾的DNA探針可以干擾蛋白質的結合。結合位點上未被修飾的DNA片段才能與蛋白結合，然后將DNA從被修飾的堿基處切割，電泳分離，結合蛋白的DNA在結合位點上不能被修飾，不能切斷，可確定結合位點的位置。 4 Dnase I 足紋分析 蛋白
蛋白質組與蛋白質組學簡介1
一、蛋白質組概念：一個細胞、一個組織或一個機體全部基因所表達的全部蛋白質。 二、蛋白質組學研究范疇 1.蛋白質和蛋白質間 2.蛋白質和核酸之間 3.蛋白質及其組成質點的分離、分析、鑒定 4.蛋白質結構分析 5.生理、病理或不同發育狀態下蛋白質組表
雙向電泳
實驗概要本實驗介紹了雙向電泳技術，先進行等電聚焦電泳（按照pI分離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），經染色得到二維分布的蛋白質圖。實驗原理雙向凝膠電泳的原理是第一向基于蛋白質的等電點不同用等電聚焦分離，第二向則按分子量的不同用SDS-PAGE分離，把復雜蛋白混合物中的蛋白質在二維平面上
雙向電泳
蛋白質組研究的發展以雙向電泳技術作為核心. 雙向電泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分離約1 000個E.coli蛋白，并表明蛋白質譜不是穩定的，而是隨環境而變化. 雙向電泳原理簡明，第一向進行等電聚焦，蛋白質沿pH梯度分離，至各自的等電點；隨后，再沿垂直的方向進行分子量
雙向電泳操作步驟——雙向電泳操作步驟
實驗方法原理雙向電泳（two-dimensional electrophoresis）是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合，即先進行等電聚焦電泳（按照pI分離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒ddH2O溴酚藍指示劑
蛋白質組，蛋白質組學及研究技術路線
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
蛋白質組，蛋白質組學及研究技術路線
基因組(genome)包含的遺傳信息經轉錄產生mRNA，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類的mRNA稱為轉錄子組(transcriptome)。很顯然，不同細胞在不同生理或病理狀態下轉錄子組包含的mRNA的種類不盡相同。mRNA經翻譯產生蛋白質，一個細胞在特定生理或病理狀態下表達的所有種類
蛋白質雙向電泳(twodimensional－electrophoresis)過程與體會3
二、一向電泳（13cm的holder）（1）取大約70-100ng的蛋白與溶脹液混合總體積達到250vl（2）將上述溶液加到holder 的兩個電極之間。（3）去掉膠條的保護膜，膠面朝下，先將膠條尖端朝膠條槽的尖端方向放入膠條槽中，慢慢下壓膠條，并前后移動，避免生成氣泡，最后放下膠條平端，使溶液浸濕
蛋白質雙向電泳(twodimensional－electrophoresis)過程與體會1
雙向電泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最簡單的裝備推薦如下，適合于沒多少money做IPG又想做“熱”的所謂蛋白質組的，嘻嘻！IEF用Biorad的圓盤電泳槽（不行用國產的吧，不推薦），SDS-PAGE用六一廠的就可以了（ft，六一廠應該給我money吧，給你做廣告
蛋白質雙向電泳(twodimensional－electrophoresis)過程與體會2
2.3.2 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）選用DYY-Ⅲ型（北京六一儀器廠生產）電泳槽（規格為200×200×1mm），分離膠濃度為12%，無濃縮膠。待膠聚合后，將電聚焦后已經平衡的膠條平放于濃縮膠頂端（避免膠條拉直），并用1%瓊脂糖（電極緩沖液配制）封膠，特別應注意避免膠條與
雙向電泳的新進展和新工具
隨著蛋白質組學概念的提出，雙向電泳(2D gel electrophoresis)一度曾變得很流行。近幾年，因質譜技術的快速發展，LC-MS的熱度似乎更高。然而，在某些應用上，雙向電泳更有優勢。 雙向電泳提供了整個樣品的鳥瞰圖，而這是質譜無法比擬的。它可以對樣品中復雜的蛋白質進行整體性
雙向電泳實驗
試劑、試劑盒 尿素去污劑儀器、耗材 聚丙烯酰胺凝膠實驗步驟 一、第一向1. 等電聚焦凝膠的準備雙向電泳通常用聚丙烯酰胺凝膠作介質，但需含有 8 mol/L 尿素、0.5%~2% 非離子或兩性離子去污劑。為了增加樣品的可溶性，可加 0.5% CHAPS。在第一向電泳中，最重要的是用載體兩性電解