cccDNA的檢測方法
cccDNA和rcDNA在結構和理化特性上有三點不同：①rcDNA在正鏈與負鏈上均有缺口或缺刻，只是部分區域互補故能形成環狀結構，但非超螺旋結構；而cccDNA兩條鏈均是完整的，二者共價互補，形成超螺旋結構。②rcDNA能與蛋白質共價結合，cccDNA則不能。③由于缺口或缺刻的存在，rcDNA可以被一些核酸酶如外切核酸酶Ⅲ(exonuclease Ⅲ)、綠豆核酸酶(mung beannuclease)等降解成寡核苷酸或單核苷酸，而cccDNA則由于是超螺旋且雙鏈結構均是完整的，一般不會被上述酶降解。上述差異是設計和建立cccDNA檢測技術的基礎。......閱讀全文
cccDNA的檢測方法
cccDNA和rcDNA在結構和理化特性上有三點不同：①rcDNA在正鏈與負鏈上均有缺口或缺刻，只是部分區域互補故能形成環狀結構，但非超螺旋結構；而cccDNA兩條鏈均是完整的，二者共價互補，形成超螺旋結構。②rcDNA能與蛋白質共價結合，cccDNA則不能。③由于缺口或缺刻的存在，rcDNA可以被
cccDNA檢測方法及應用價值
細胞外乙型肝炎病毒DNA是一種松弛環狀的雙鏈DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子，其兩條鏈均不是閉合的，其中負鏈較長，約3200個堿基，含有乙肝病毒基因組的全長基因，在其5’起始端與3’末端之間有一個數個堿基的“缺刻”(nick)；正鏈較短，有較大的“缺口”(gap)，其
cccDNA的定性檢測
既往絕大多數文獻報道的是用Southern blot對cccDNA進行定性檢測，該方法是分子生物學的經典方法，但技術要求較高，敏感度低。近年來，也有較多文獻報道用PCR技術對cccDNA進行檢測。但是，由于PCR技術靈敏度極高，rcDNA和cccDNA的序列又具有高度的同源性，因此在用PCR技術檢測
cccDNA的定量檢測
在定性檢測的基礎上，可以進一步對cccDNA進行定量檢測。仍以PCR定量分析技術中，尤其是競爭PCR技術的敏感性和精確度高。方法是在PCR反應管中加入一種已知量的、能與野生模板等效擴增的內參照，內參照是經過突變處理的，其兩端尤其是引物退火區的序列與野生模板相同。PCR擴增后通過一定的方法將野生片段與
關于共價閉合環狀DNA（cccDNA）的檢測方法介紹
共價閉合環狀DNA（cccDNA）和rcDNA在結構和理化特性上有三點不同： ①rcDNA在正鏈與負鏈上均有缺口或缺刻，只是部分區域互補故能形成環狀結構，但非超螺旋結構；而cccDNA兩條鏈均是完整的，二者共價互補，形成超螺旋結構。 ②rcDNA能與蛋白質共價結合，cccDNA則不能。 ③
共價閉合環狀DNA（cccDNA）的檢測方法及應用價值
細胞外乙型肝炎病毒DNA是一種松弛環狀的雙鏈DNA（relaxed circularDNA，rcDNA）分子，其兩條鏈均不是閉合的，其中負鏈較長，約3200個堿基，含有乙肝病毒基因組的全長基因，在其5’起始端與3’末端之間有一個數個堿基的“缺刻”（nick）；正鏈較短，有較大的“缺口”（gap）
武漢大學開發新方法，靈敏檢測乙肝病毒cccDNA
武漢大學中南醫院的研究人員近日利用微滴式數字PCR（ddPCR）技術，開發出一種新型的HBV檢測方法。 201804181524017685822.png 根據世界衛生組織的最新統計，全球約有2.57億人感染乙型肝炎病毒（HBV）。慢性HBV感染會造成肝硬化和肝細胞癌（HCC）等嚴重
簡述共價閉合環狀DNA（cccDNA）的檢測意義
乙肝病毒不僅僅是一種嗜肝病毒，一些肝外組織中也可檢測到乙肝病毒DNA，如腎臟、胰腺以及外周血單個核細胞（peripheralblood mononuclearcell,PBMC）等。早就有人發現乙肝病毒可以感染白細胞,而這種免疫細胞的感染似乎有利于病毒逃避免疫反應，從而導致機體清除乙肝病毒的能力
關于共價閉合環狀DNA（cccDNA）的定量檢測介紹
在定性檢測的基礎上，可以進一步對共價閉合環狀DNA（cccDNA）進行定量檢測。仍以PCR定量分析技術中，尤其是競爭PCR技術的敏感性和精確度高。方法是在PCR反應管中加入一種已知量的、能與野生模板等效擴增的內參照，內參照是經過突變處理的，其兩端尤其是引物退火區的序列與野生模板相同。PCR擴增后
關于共價閉合環狀DNA（cccDNA）的定性檢測的介紹
既往絕大多數文獻報道的是用Southern blot對cccDNA進行定性檢測，該方法是分子生物學的經典方法，但技術要求較高，敏感度低。 近年來，也有較多文獻報道用PCR技術對cccDNA進行檢測。但是，由于PCR技術靈敏度極高，rcDNA和共價閉合環狀DNA（cccDNA）的序列又具有高度的
cccDNA的功能和結構特點
在乙肝病毒的復制過程中，病毒DNA進入宿主細胞核，在DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補齊，形成超螺旋的共價、閉合、環狀DNA分子（covalently closed circularDNA，cccDNA）。細胞外乙型肝炎病毒DNA是一種松弛環狀的雙鏈DNA（relaxed circularDN
cccDNA：慢性乙肝持續感染的元兇
慢性乙型病毒性肝炎影響著全球超過 2.5 億人口，每年約有 65 萬人死于 HBV 相關終末期肝病。共價閉合環狀（ccc）DNA 是慢性乙肝持續感染的元兇，作為病毒復制的中介，其在宿主肝細胞核內以微染色體的形式存在，目前的治療手段難以將其徹底清除，從而達到慢性乙肝的徹底治愈。 Gut 雜志上發
關于共價閉合環狀DNA（cccDNA）的簡介
在乙肝病毒的復制過程中，病毒DNA進入宿主細胞核，在DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補齊，形成超螺旋的共價、閉合、環狀DNA分子（covalently closed circularDNA，cccDNA）。細胞外乙型肝炎病毒DNA是一種松弛環狀的雙鏈DNA（relaxed circular
細胞內cccDNA的抽提與純化
最常用的抽提細胞內cccDNA的方法是蛋白質－去污劑沉淀法，其原理是基于rcDNA和cccDNA與蛋白質結合能力的差異。rcDNA能與蛋白質共價結合，與絕大多數細胞染色體DNA一起形成沉淀，而cccDNA不能與蛋白質結合故游離于上清中，用酚氯仿抽提上清即可得到cccDNA。根據筆者的經驗，該方法的主
乙肝病毒cccDNA檢測可作為評價抗病毒治療的新指標
????? 第二軍醫大學長征醫院繆曉輝報告，共價閉合環狀DNA(cccDNA)是乙肝病毒前基因組RNA復制的原始模板，雖然其含量較少，每個肝細胞內只有約5～50個拷貝，但對乙肝病毒的復制以及感染狀態的建立具有十分重要的意義，只有清除了細胞核內的cccDNA，才能徹底消除乙肝患者病毒攜帶狀態，是抗
關于共價閉合環狀DNA（cccDNA）的展望介紹
我們對HBVcccDNA的認識有待提高。在檢測技術上有許多問題需要解決，比如，如何進一步提高靈敏度，如何避免rcDNA同時被擴增（國內有些文獻報告的結果可能忽視了這一問題），如何簡化操作步驟，從而能夠被廣泛應用等。檢測或監測cccDNA的臨床意義也有待挖掘，比如，可以通過細胞和動物模型，來評判新
細胞內共價閉合環狀DNA（cccDNA）的抽提與純化的介紹
最常用的抽提細胞內共價閉合環狀DNA（cccDNA）的方法是蛋白質－去污劑沉淀法，其原理是基于rcDNA和共價閉合環狀DNA（cccDNA）與蛋白質結合能力的差異。rcDNA能與蛋白質共價結合，與絕大多數細胞染色體DNA一起形成沉淀，而共價閉合環狀DNA（cccDNA）不能與蛋白質結合故游離于上
全球攻關－|－探究乙肝治療路徑
乙型肝炎病毒（HBV）感染是肝硬化、肝癌發生的重要原因。人類對HBV的研究歷時多年，抑制病毒的疫苗早已上市，盡管治愈乙肝的方法尚未找到，但正如近日發表在《科學》上的一篇聚焦在研乙肝治療方法的文章指出的，目前的候選藥物幾乎已經瞄準了HBV復雜生命周期中的每一個點。因為土撥鼠體內有一種與乙肝病毒類似
全球攻關－探究乙肝治療路徑
乙型肝炎病毒（HBV）感染是肝硬化、肝癌發生的重要原因。人類對HBV的研究歷時多年，抑制病毒的疫苗早已上市，盡管治愈乙肝的方法尚未找到，但正如近日發表在《科學》上的一篇聚焦在研乙肝治療方法的文章指出的，目前的候選藥物幾乎已經瞄準了HBV復雜生命周期中的每一個點。 “復制模板”增加治療難度
HBV－RNA檢測技術盤點——RTqPCR－VS－RNA捕獲探針法
慢性乙型肝炎影響著世界上超過2.4億人口[1]，難以治愈已成為公認的事實。大多研究認為難以治愈與肝細胞核內HBV共價閉合環狀DNA（cccDNA）半衰期過長且難以清除有關。[2]因此，肝內檢測cccDNA對評估抗病毒治療療效和治療終點具有重要意義。但直接檢測cccDNA十分困難，通常需要進行肝組織活
HBcrAg：慢性乙型肝炎病毒感染的標志物
全世界大約2。4億人感染了慢性乙型肝炎（CHB），其中約15%～40%的患者會進展為肝硬化、失代償和/或肝細胞癌（HCC）。在HBV的生活周期中，共價閉合環狀DNA（cccDNA）的形成是關鍵一步，它是HBV的原始復制模板，只要肝細胞中還存在cccDNA，HBV的復制就不會停止。圖片來源于網絡
肌電圖檢測的檢測方法
（一）運動神經傳導速度（motorn conduction ve1OCi ?-ty , MCV ) 1 ．電極位置記錄電極用表面電極，放在所要測定的運動神經支配的遠端肌肉上，參考電極放在肌膛上，在記錄電極的遠端，和記錄電極間距離大約3 一4cm ，地線放在刺激電391 ）贏鱺；翱纂藻暴蘸瓤洲麟
HBsAg定量檢測及其臨床意義
???HBsAg的定量檢測是目前監測和預測抗乙肝病毒治療后應答的新工具，結合HBV DNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）的陰轉和血清轉換，我們能更準確地預測患者的近期和遠期抗病毒治療的療效。因此，該檢測已在臨床上得以廣泛開展，特別是被用于判定抗病毒治療療效，以及根據早期下降的速度和幅度來預測遠期療
利用CRISPR/Cas9來攻克乙肝
在一項新研究中，麻省理工學院的研究人員利用CRISPR/Cas9 系統，對受到感染的哺乳動物肝細胞進行基因組編輯，從中刪除了乙肝病毒(HBV)DNA。根據發表在《Scientific Reports》雜志上的研究結果，該研究小組靶向切割了HBV病毒共價閉合環狀DNA(cccDNA)的一些特異位點
肌酐檢測的檢測方法
1.堿性苦味酸終點比色法 血清中的肌酐與苦味酸在堿性溶液中生成黃紅色的苦味酸鹽復合物，最初采用的方法是終點比色法，在510～520nm處測定其吸光度，由此計算血清肌酐濃度。 2.酶法測定 酶法測定肌酐主要是利用肌酐酶催化肌酐水解生成肌酸及其逆反應。
國內首個乙肝病毒前基因組RNA檢測試劑盒上市
專項啟動會合影。（北醫供圖） 近日，國內首個血清乙型肝炎病毒前基因組RNA熒光定量檢測試劑盒獲國家藥品監督管理局批準上市。意味著這一可作為慢性乙肝患者安全停藥指導依據的新靶標將正式進入臨床應用，可在各級醫院開展檢測。 該試劑盒由北京大學基礎醫學院魯鳳民教授團隊和北京熱景生物技術股份有限
－攻克乙肝不是夢，基因編輯靶向“剪切”乙肝病毒
7月28日是一年“世界肝炎日”，肝炎是肝臟的炎癥，最常見的原因是病毒感染。病毒性肝炎分為甲、乙、丙、丁和戊型，雖然病毒種類不同，但都足以對人構成嚴重危害，其中乙型和丙型肝炎可以導致肝硬化和肝癌的發生，給全球帶來嚴重的疾病負擔。 乙型肝炎病毒簡稱乙肝病毒，是一種DNA病毒，屬于嗜肝DNA病毒科（
慢性乙型肝炎病毒患者肝內原位病毒學分析
乙肝病毒是一種嚴重影響人類健康的病原體，也是引發慢性乙肝的元兇。根據國際衛生組織2015年估計，全球約有2.4億慢性乙肝患者，大多分布在低收入及中等收入國家，每年約有78萬患者死于慢性乙肝感染所致的肝衰竭、肝硬化和癌。在中國，約有9300萬慢性乙肝感染者，其中，由乙肝病毒引發的肝硬化和肝癌患者比
提高質粒DNA的轉化效率方法有哪些
1.細胞生長狀態和密度:不要用經過多次轉接或儲于4℃的培養菌，最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉接用于制備感受態細胞的菌液。細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好，可通過監測培養液的OD600來控制。DH5α菌株的OD600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml左右(不同的菌株情況有所不
SNP－的檢測方法
SNP 的分型技術可分為兩個時代，一為凝膠時代，二為高通量時代。凝膠時代的主要技術和方法包括限制性酶切片段長度多態性分析（RFLP）、寡核苷酸連接分析（OLA）、等位基因特異聚合酶鏈反應分析（AS2PCR）、單鏈構象多態性分析（SSCP）、變性梯度凝膠電泳分析（DGGE），雖然這些技術與高通量時代的